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目的： 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methecillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA)感染已经成为医学界广泛关注的世界性难题。MRSA对几乎所有β-内酰胺类抗生素耐药，其造成的感染难以控制，病死率相当高。目前治疗MRSA唯一有效的抗生素是万古霉素，一旦MRSA对万古霉素产生耐药性，对于MRSA的感染我们将面临无药可用的境地。目前已在美国、日本、法国、澳大利亚等国发现耐万古霉素的MRSA，因此寻找有效控制MRSA感染新策略已成为该研究领域的当务之急。MRSA的耐药发生的机理主要是细菌内的耐药基因blaZ和mecA在β-内酰胺类抗生素诱导下分别表达产生β-内酰胺酶和青霉素结合蛋白2a(PBP2a)。其中编码β-内酰胺酶基因blaZ的表达受到感受器／传感器蛋白BlaR1的调控，BlaR1能够感受细菌生存环境中抗尘素存在，并将该信号转导入菌体内，进而诱导blaZ表达β-内酰胺酶。因此我第四军医人学硕卜学位论文们设想，如果采用某种措施阻断BlaRI向菌体内部转导诱导信号，则可能抑制blaZ的表达，使MRSA重新恢复对p一内酞胺类抗生素的敏感性。 方法: 1.MRSA的鉴定:采用美国临床实验室标准化委员会 (NCCLS)规定的质控标准，通过琼脂扩散法和琼脂筛选法鉴定检测实验菌株WHO一2、SA一l和质控菌株Al，CC25923的咐药性，通过PCR实验检测靶基因blaRI、blaZo 2.Dzl556逆转WHO一2细菌耐药性:以耐药基因blaRI的mRNA为靶序列，设计合成脱氧核酶Dzl 556，采用电穿孔技术分别将浓度为10林g·mL’l、15拼g·mL一l、20林g·mL.’02 1 556导入三组细菌内。通过平板克隆形成实验观察Dzl 556对MRSA细菌耐药性的影响，通过R下PCR观察Dzl556对耐药关键基因blaRI、blaZ表达的抑制作用。 3.Dzl556临床分离MRsA菌株耐药性:浓度为 loog.mL一，、1509·mL一，、2009·mL一’nzl556导入细菌后，通过平板克隆形成实验观察Dzl 556对SA一l细菌耐药性的影响，通过RT-PCR检测Dzl 556对关键基因blaR了、blaZ表达的抑制作用。 结果: 1.MRSA的鉴定:琼脂扩散法:ATCC25923抑菌圈直径为ZOmm，WHO一2和SA一l无抑菌圈;琼脂筛选法:在含苯畔西林(6料g·mL一’)琼脂表面，盯ee25923不能生长，wHo一2和sA一则密布菌落;PCR试验:WHO一2和SA一l检测到靶基因片断blaRI、blaZ，而ATCC25923结果为阴性。 2.Dzl556逆转WHO一2细菌耐药性:Dzl556组在含苯畔西林(6陀.mL’)的M一H琼脂培养基表面生长的菌落单元计数明显低于第四军医大学硕l:学位论文对照组(p<0.05或P<0.01)，blaRI和blaZ的mRNA表达水平也较对照组明显降低护<0.05或尸<0.01)。而碱基错配Dzl556组对MRSA的生长和基因表达与对照组相比无显著性差异(尸>0 .05)。 3.Dzl556逆转SA一1细菌耐药性:Dzl556组在含苯啤西林(6雌.mL’’)的M一H琼脂培养基表面生长的菌落单元计数低于对照组(p<0.05或p<0.01)，blaRI和blaz的mRN^表达水平也较对照组降低(P<0.05或尸<0.01)。碱基错配Dzl 556组对MRsA的生长和基因表达与对照组相比无显著性差异(尸>0.05)。 结论: 1.标准菌株WHO一2和临床分离获得的SA一1菌株是耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌，均携带目标靶基因blaRI和blaZ。 2.抗BlaRI mRNA脱氧核酶Dzl556能够有效逆转WHO一2和临床分离获得的SA一1菌株的耐药性。