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CXCR3-B分子属于G蛋白偶联受体家族成员,全长由415个氨基酸构成,是目前发现的唯一在NH2端含ELR序列的CXC家族受体。鉴于ELR序列与血管增生密切相关,推断ELR序列在CXCR3-B分子功能方面具有特殊的意义,因此研究CXCR3-B分子N端51个氨基酸的功能将不仅为CXC家族在血管增生效应方面的研究提供新的思路,而且在解释PF4及其它CXC家族无ELF序列趋化因子抑制肿瘤增生的作用机理方面也有可能会有重大突破。本实验主要制备了鼠/兔抗人CXCR3-B分子N端不同多肽的单/多克隆抗体,并对PF4抑制U937细胞增殖的作用机理进行了初步研究。首先,用化学方法合成CXCR3-B分子N端第1～19个、第17～35个氨基酸和第33～51个氨基酸;同时利用RT-PCR结合PCR克隆CXCR3-B基因,测序正确后,与PGEM-T表达载体链接,转化BL21感受态细胞进行融合蛋白的表达,取裂解后的GST-CXCR3-B融合蛋白表达菌体的上清用GSTrapFFTM纯化柱纯化,另取一部分上清用80ul（1U/ul）的Factor Xa剪切;随后用获得的人CXCR3-B分子N端1-51个氨基酸多肽融合蛋白免疫Balb/c小鼠,ELISA法检测抗血清效价及筛选阳性克隆用于细胞融合实验,以期获得兔/鼠抗人CXCR3-B分子N端多肽多/单克隆抗体。Western blot与免疫组化鉴定后,通过流式细胞术初步研究抗CXCR3-B抗体在PF4抑制肿瘤转移方面的作用机制。结果显示:化学法合成的CXCR3-B分子N端多肽抗原纯度分别可达98%、88.54%和80%,可用来作为抗原免疫动物;融合蛋白表达后SDS-PAGE分析显示,目的蛋白在上清中表达,且Western blot表明抗CXCR3-B抗体可识别GST-CXCR3-B融合蛋白,说明此融合蛋白已获得正确表达;经Factor Xa剪切后Westernblot分析发现剪切下来的CXCR3-B可被抗CXCR3-B的多抗识别,可用于抗CXCR3-B单克隆抗体的筛选。免疫小鼠后筛选出效价高的小鼠进行细胞融合实验,共获得9株CXCR3-B的单克隆抗体,其中3株是针对CXCR3-B分子N端第1～19个氨基酸的抗体,有2株是针对第33～51个氨基酸抗体,有3株识别第1～51个氨基酸片段,有1株识别第1～19和第33～51两个氨基酸片段,且免疫组化鉴定以上单克隆抗体亦能识别天然组织中的CXCR3-B;初步研究显示,抗CXCR3-B抗体可部分阻断PF4与U937细胞的结合,从而抑制血管内皮细胞的增殖和迁移。