为了了解猪卵母细胞成熟前后卵丘细胞转录组的差异,本研究在前期预实验比较正常卵巢和异常卵巢中脂质代谢相关基因的基础上,收集了生发泡期（GV期）和第二次减数分裂中期（MⅡ）卵母细胞周围的卵丘细胞,采用RNA测序技术比较了两个阶段m RNA和micro RNA转录本的差异,对差异候选基因进行了生物信息学分析和体外验证,探索了骨形态蛋白2（BMP2）、ssc-mi R-101、ssc-mi R-155-5p在卵丘细胞扩散中所起的作用。具体研究结果如下:1.为了研究正常卵巢和囊肿卵巢中脂类代谢相关基因的表达,分别收集卵巢组织、颗粒细胞、卵母细胞,运用实时荧光定量PCR技术对脂肪代谢相关基因的表达进行比较。结果显示;囊肿卵巢组织中FABP3和CPT1表达水平显著高于正常卵巢组织,囊肿卵巢组颗粒细胞中FABP3表达水平极显著高于正常卵巢组;囊肿卵巢卵母细胞中CPT1、FABP4的表达极显著高于正常卵巢GV期和MⅡ期卵母细胞。2.通过RNA-Seq技术对GV期和MⅡ卵母细胞周围的卵丘细胞进行编码转录本测序,对候选基因进行了验证,进而在成熟培养液中添加不同浓度的BMP2,检测卵母细胞成熟效果。结果显示:与MⅡ期卵母细胞周围卵丘细胞相比,GV期卵母细胞周围的卵丘细胞中存在3 789个差异表达基因,其中2 085个上调基因,1 704个下调基因;采用q PCR对候选差异表达基因HAS、PTX3、TNFAIP6、CPT1、CD36、BMP2、FOXO1进行验证,结果与RNA-Seq的结果变化趋势基本一致;在成熟培养液中添加50 ng/ml的BMP2可显著促进卵母细胞的成熟,显著提高了卵母细胞中成熟促进因子MPF的转录水平,但添加100 ng/ml的BMP2反而抑制了卵母细胞的体外成熟;在缺乏卵泡液的条件下,50 ng/ml的BMP2可促进卵母细胞的成熟和成熟24 h时卵母细胞中MPF的转录,显示BMP2与卵泡液可能存在一定的拮抗作用。3.通过RNA-Seq技术对GV期和MⅡ卵母细胞周围的卵丘细胞进行micro RNA测序,在对部分候选mi RNA进行验证后,选择ssc-mi R-101、ssc-mi R-155-5p为研究对象,利用靶基因预测网站预测其靶基因,采用q RT-PCR、Western blot、荧光素酶报告载体等方法对靶基因进行验证,并对上述两个基因在卵母细胞成熟中的作用进行了研究。结果显示:与MⅡ期卵母细胞周围卵母细胞相比,GV期卵母细胞周围的卵丘细胞中存在40个差异表达micro RNA基因,其中13个上调,27下调基因;采用q PCR对候选差异表达基因ssc-mi R-101、ssc-mi R-130b-5p、ssc-mi R-140-5p、ssc-mi R-155-5p、ssc-mi R-let-7f进行验证,结果与与RNA-Seq的结果变化趋势基本一致;mi RNA靶基因预测网站显示,HAS2和PTGS2基因可能是mi R-101的靶基因,而SOCS1可能是ssc-mi R-155-5p的靶基因;荧光素酶报告载体分析结果表明了预测的准确性。在体外分离培养的卵丘细胞中转染ssc-mi R-101和ssc-mi R-155模拟物可显著抑制预测靶基因的表达,而转染抑制它们的抑制物则促进预测靶基因的表达;利用脂质体介导ssc-mi R-101和ssc-mi R-155-5p模拟物和抑制物转染卵母细胞-卵丘细胞复合体,发现与抑制物相比,模拟物组卵母细胞成熟后卵丘细胞的扩散受到抑制。