中药复方对猪源大肠杆菌的体外抑制及耐药消除作用

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大肠杆菌为仔猪细菌性腹泻的主要病原,其高致病力和高水平多重耐药加大了仔猪腹泻的防治难度,所以研制安全有效的新药迫在眉睫。已有研究显示,中药对细菌具有较好的抑制作用,同时对细菌耐药性具有一定消除作用,这对耐药细菌的防控具有重要意义。本试验根据中药相须配伍原则,选择杨树花、地榆、地锦草、马齿苋等清热解毒类中药进行配伍,以临床分离并经PCR鉴定的猪源大肠杆菌为研究对象,通过微量二倍稀释法测定四组中药复方对大肠杆菌的MIC和MBC,并在扫描电镜和透射电镜下观察各中药复方对大肠杆菌微细结构的影响,以明确四组中药复方对大肠杆菌的体外抑制作用及机制;通过K-B法检测分离大肠杆菌的耐药性,PCR扩增耐药基因,影印法检测各中药复方对多重耐药大肠杆菌的耐药消除率,筛选出耐药消除子,并比较中药作用前后大肠杆菌耐药表型和耐药基因的变化,初步探索中药复方对大肠杆菌的耐药消除机理。结果如下:1.杨树花-地榆、杨树花-地锦草、杨树花-马齿苋和地榆-马齿苋复方均对大肠杆菌表现抑制作用,MIC范围为62.5 mg/m L~250 mg/m L,MBC范围为125 mg/m L~500mg/m L其中杨树花-地榆和杨树花-地锦草复方抑制效果较好,MIC为62.5 mg/m L,MBC为125 mg/m L。2.扫描电镜观察各中药复方作用后的大肠杆菌,发现菌体胀大,表面粗糙,个别菌体破裂;透射电镜观察各中药复方作用后的大肠杆菌,发现菌体变形,内部空泡化,细胞壁细胞膜结构模糊,胞质不均匀,部分菌体破裂。四组中药复方中以杨树花-地榆复方作用效果最明显。3.37株大肠杆菌对15种抗生素表现不同程度耐药,对磺胺异噁唑和复方新诺明耐药最严重,耐药率均为91.89%,其次为四环素和氨苄西林,耐药率分别为78.38%和75.68%,未发现耐美罗培南和多粘菌素菌株;耐药基因bla TEM检出率最高,为91.89%,其次为aac C3-Ⅱ,检出率为37.84%。4.四组中药复方对17号大肠杆菌耐药消除率均在10%以上,以杨树花-马齿苋复方消除率最高,为16%;经各中药复方作用后大肠杆菌对庆大霉素耐药性由耐药转为敏感,aac C3-Ⅱ、aac C2、aph(3’)-Ⅱ三种耐药基因发生丢失现象。四组中药复方对14号大肠杆菌无明显耐药消除作用。以上结果表明,四组中药复方均对大肠杆菌有一定抑制作用,对细菌细胞壁和细胞膜的破坏作用可能是其对细菌的主要抑制机理之一;各中药复方均可消除大肠杆菌对庆大霉素的耐药性,并导致aac C3-Ⅱ、aac C2、aph(3’)-Ⅱ三种耐药基因丢失,其消除机制与通过消除主效耐药基因来逆转大肠杆菌耐药表型有关。
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