EGCG对鼻咽癌裸鼠移植瘤放疗增敏的实验研究

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目的  初步探讨 EGCG诱导鼻咽癌细胞凋亡及对鼻咽癌裸鼠移植瘤放射治疗敏感性的影响,为寻找一种鼻咽癌放射治疗的同期联合使用药物、以提高疗效提供理论依据。  方法  1.用不同浓度的EGCG(0、60、90、120 mg/l)作用于低分化鼻咽癌细胞株CNE-2细胞,干预24、48、72h后,应用MTT间接检测CNE-2细胞增殖变化。  2.用不同浓度的 EGCG(0、60、90、120mg/l)作用于低分化鼻咽癌细胞株CNE-2细胞,干预48h后,流式细胞仪检测细胞周期的变化;Hoechst33258染色观察细胞凋亡,并计算细胞凋亡率;RT-PCR法检测这个过程中BcL-2、Bax、Caspases-3的表达变化。  3.将低分化鼻咽癌CNE-2接种于4-6周龄的雄性BALB/C裸鼠皮下,待移植瘤造摸成功后,选择移植瘤动物随机分组,分别采用生理盐水、EGCG、放疗、EGCG+放疗等方法处理各组动物:对照组:腹腔注射生理盐水0.3ml,隔日一次;EGCG组:按30mg/kg给药,腹腔注射,隔日一次;放疗组:电子直线加速器照射,每次每只局部5Gy。每隔3天放疗一次,共20Gy。放疗联合EGCG组:按30mg/kg给药,腹腔注射,隔日一次。注药24小后开始放疗,每只局部给予5Gy,每隔3天局部再放疗一次,共20Gy。21天处死动物,取出移植瘤,称重,分两份,分别应用 HE染色病理学观察瘤体组织形态学改变及RT-PCR法检测裸鼠肿瘤组织中 Bcl-2、Bax、Caspases-3因子的表达变化。  结果  1.EGCG处理CNE-2细胞后,与对照组相比,细胞增殖受到显著抑制(P<0.05);随 EGCG浓度及作用时间增加,对细胞增殖抑制作用逐渐增强,呈明显的时间和剂量依赖性。  2. EGCG将细胞阻滞于G1期,随EGCG浓度增加,阻滞作用逐渐增强。60mg/L、90mg/L和120mg/LEGCG处理组的G1期细胞分别为(68.5±1.3)%,(70.9±1.7)%和(73.6±2.1)%,与对照组G1期细胞为(59±0.2)%比较,差异具有显著意义(P<0.05)。  3. Hoechst33258染色后,凋亡细胞核或浆内出现致密浓染颗粒状荧光,非凋亡细胞核染色均匀。60、90和120mg/LEGCG组细胞凋亡率分别为(15.2±1.3)%、(24,5±1.1)%、(28.1±1.4)%,与对照组比较(2.7±0.3)%,差异具有显著性(p<0.05)  4. EGCG作用于CNE-2细胞48h后,BcL-2表达明显下调,而Bax、Caspase-3表达被诱导上调。  5.3周后处死动物并剥离瘤体称重,生理盐水、EGCG、放疗、放疗+EGCG组瘤体重量分别为1.4±0.15、0.81±0.11、0.41±0.09、0.27±0.06。各实验组肿瘤抑制率分别为35.7%、64.2%、80.7%,而以EGCG+放疗组对肿瘤的抑制效果最明显(P<0.05)。  6.移植瘤组织均经病理切片苏木精-伊红染色,对照组示典型低分化鼻咽癌病理特点。放疗组细胞肿胀,胞浆染色较浅,核基本消失;EGCG组有小块区域还可见核碎裂;EGCG加放疗组除了有小块区域的典型坏死改变外,同时出现大量细胞核碎裂、核溶解,并在肿瘤组织细胞非死亡区仍然能见到位于细胞间和被瘤细胞吞噬的凋亡小体。7.各组瘤体组织中均检测到Bcl-2、Bax、Caspase-3mRNA表达,与对照组相比、EGCG组、放疗组、EGCG+放疗组均能下调 BcL-2的表达及上调Bax与Caspase-3的表达,而以EGCG+放疗组对Bcl-2、Bax、Caspase-3mRNA表达的影响最为显著。  结论  1.EGCG能诱导鼻咽癌细胞CNE-2的凋亡,其机制可能与下调Bcl-2表达及上调Bax及Caspase-3的表达有关。  2.EGCG能增强鼻咽癌裸鼠移植瘤放疗的敏感性,其机制可能与下调瘤体组织中Bcl-2的表达及上调瘤体组织中Caspase-3及Bax的表达有关。
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