论文部分内容阅读
背景:心肌肥大和纤维化可以参与多种心血管疾病的发展过程。然而持续的存在会引起心脏结构的改变,影响心脏功能,最终导致心力衰竭的发生。莫诺苷(Morroniside,Mor)是山茱萸中的一种环烯醚萜苷。已经有研究表明,莫诺苷不仅可以预防大鼠的脑缺血/再灌注损伤,而且还可以预防大鼠的急性心肌梗塞。而有关于莫诺苷对心肌肥大的影响,目前尚未见报道。研究目的:本研究的目的就是使用血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AngⅡ)建立的在体以及体外心肌肥大模型,探讨莫诺苷是否对AngⅡ诱导的心肌肥大有抑制作用及其作用相关机制。方法:实验对象为体重24～26g、10～12周龄的雄性C57BL/6为背景的野生型(WT)小鼠和H9C2大鼠心肌细胞细胞系。通过向小鼠皮下植入微型泵的方法注入AngⅡ 4周,建立心脏肥大小鼠模型。同时通过向心脏肥大小鼠模型给予莫诺苷灌胃4周给药的方式,建立莫诺苷治疗组小鼠。AngⅡ刺激48小时获得肥大细胞模型作为模型组。而用莫诺苷预处理肥大心肌细胞建立莫诺苷治疗组心肌细胞。通过形态学,超声心动图检测,血液动力学检测,组织学分析和肥大标志物及纤维化标志物表达分析来评估莫诺苷在AngⅡ诱导的心肌肥大中的具体作用。分别对动物模型及细胞模型通过蛋白质免疫印迹法(western blot)检测NF-κB途径蛋白的核内表达水平。最后我们使用了NF-κB转录抑制剂(PDTC)预处理各组心肌细胞1小时,观察各组心肌细胞大小的变化,并检测了Ca MKⅡ and MAPK信号通路中蛋白的表达水平变化情况。进一步明确NF-κB通路在莫诺苷对心肌肥大的调控作用。结果:结果显示,与对照组[HW/BW:(4.49±0.1089)mg/g;HW/TL:(7.97±1.043)mg/g;心肌细胞表面积[(323.2±18.28)μm~2]相比,模型组小鼠的心脏质量与体重(5.716±0.126)mg/g或胫骨长度的比值[(11.54±0.6012)mg/g]都明显增加,心肌细胞表面积[(522.3±7.012)μm~2]也显著增加,而莫诺苷治疗组中HW/BW[(4.716±0.2213)mg/g、HW/TL[(7.939±0.790)mg/g]以及心肌细胞表面积[(372.6±19.4)μm~2]较模型组降低,差异有统计学意义。Masson和免疫组化染色结果显示,模型组的纤维化面积[(4.951±0.674)%]与胶原蛋白的沉积[胶原蛋白I:(5.513±1.046)%;胶原蛋白ⅡI:(7.652±2.252)%]较对照组[纤维化面积:(0.783±0.195)%;胶原蛋白I:(0.707±0.151)%;胶原蛋白ⅡI:(1.019±0.041)%]明显增加。但莫诺苷治疗组中纤维化面积[(1.41±0.345)%]以及胶原蛋白含量[胶原蛋白I:(1.049±0.231)%;胶原蛋白ⅡI:(1.754±0.66)%]较模型组降低。另外,心脏超声检查显示模型组中心室收缩期前壁(1.604±0.095)mm、舒张期前壁(1.180±0.069)mm、收缩期后壁厚度(1.809±0.175)mm、舒张期后壁(1.544±0.066)mm同样高于对照组[收缩期前壁厚度:1.351±0.138;舒张期前壁(0.849±0.043)mm;收缩期后壁厚度(1.337±0.172)mm;舒张期后壁(1.009±0.070)mm],莫诺苷治疗组[收缩期前壁厚度:(1.369±0.042)mm;舒张期前壁(0.884±0.056)mm;收缩期后壁厚度(1.549±0.149)mm;舒张期后壁(1.093±0.082)mm]较模型组下降;而模型组的心室内径[收缩期内径:(2.203±0.095)mm;舒张期内径:(3.096±0.233)mm]以及射血分数(49.84±2.062)%和缩短分数(26.88±1.128)%均低于对照组[收缩期内径(2.367±0.147)mm;舒张期内径:(3.703±0.24)mm;射血分数(63.21±1.693)%;缩短分数:(36.03±1.055)%]以及莫诺苷治疗组[收缩期内径:(2.347±0.117)mm;舒张期内径:(3.602±0.177)mm;射血分数(59.46±2.384)%;缩短分数:(32.35±2.063)%],差异有统计学意义。在体外实验中,莫诺苷组的细胞表面积[(480.8±24.1)μm~2]同样较模型组[(595.6±43.19)μm~2]降低。并且莫诺苷显著抑制了AngⅡ诱导的肥大标志物,纤维化标志物和炎症因子m RNA表达水平的增加。此外,莫诺苷可明显抑制AngⅡ诱导的NF-κB信号通路中蛋白的核内表达量。并且,与AngⅡ刺激的细胞[(598.9±39.47)μm~2]相比,经过PDTC处理的细胞表面积的增加[(462.3±41.38)μm~2]受到了抑制,但与PDTC莫诺苷联合治疗的细胞[(464.1±28)μm~2]相比,差异无统计学意义。研究结论:本研究分别从体内和体外实验中显示了莫诺苷可以减弱AngⅡ诱导的心肌肥大和心肌纤维化。并且莫诺苷有可能是通过调控NF-κB信号通路来发挥作用的。