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黄蘑多糖(PolysaccharideofHuangmo,HMP)是一种药用价值很高的活性真菌多糖,具有抗癌、抑癌及防辐射等作用。迄今为止,国内外很少有关于黄蘑多糖分离纯化的报道。本实验对黄蘑多糖除蛋白的方法及其提取纯化工艺进行了初步研究,确定了除蛋白的最佳方法和条件,并对提取纯化工艺作了优化。本文对HMP的成分进行分析,旨在进一步了解其化学结构和生物活性,为进一步研究黄蘑多糖的分离打下基础。通过实验得到以下结论:
1、对黄蘑多糖提取的工艺进行研究,采用L9(34)正交设计进行实验,确定热水提取多糖的最佳条件:料液比为1∶25,提取温度为90℃,提取时间3小时。按最佳条件测得黄蘑粗多糖产率为21.32﹪。
2、在除蛋白时,对Sevag法、三氯乙酸法(TCA)、乙酸锌和亚铁氰化钾法(以下简称为铁-锌法)三种方法的除蛋白效果进行了比较。结果表明用TCA法除蛋白后,多糖纯度最高,达到了81.5﹪,冷冻干燥后多糖为灰白色。对TCA的用量进行了选择,实验确定出,当m1(粗多糖的质量)∶m2(三氯乙酸的质量)=1∶6时,TCA脱蛋白效果最好,多糖纯度为83.7﹪。
3、用紫外分光光度法和高效液相色谱法对黄蘑多糖的纯度进行鉴定,从谱图可看出,除蛋白后,黄蘑多糖中基本无杂质,纯度较高,进一步证明了TCA除黄蘑多糖中的蛋白是可行的。
4、除蛋白后的HMP依次经过901大孔树脂层析柱、阴离子交换层析柱(SephadexDEAE-A25)后,分离得到两个组分HMP-Ⅰ和HMP-Ⅱ。HMP-Ⅰ和HMP-Ⅱ分别经凝胶排阻柱(SephadexG-75)进一步纯化,HMP-Ⅰ被分离成HMP-Ⅰa和HMP-Ⅰb两个组分,回收率分别为35﹪和62.8﹪;HMP-Ⅱ得到一个单峰HMP-Ⅱa,其回收率为91﹪。
5、HMP-Ⅱa水解物通过高效液相色谱、薄层色谱和气相色谱分析,初步确定HMP-Ⅱa是由甘露糖基和半乳糖基组成的杂多糖,摩尔比大致为4∶17,分子量大约为5200。