沙门菌是一类重要的食源性病原微生物,该病原血清型多达2500多种,其中大多数具有致病性,引起动物的腹泻、败血症和母畜流产等症状,严重威胁着发展中国家养殖业的发展。由于市场上的沙门菌疫苗缺乏有效的鉴别诊断功能,使该病难以得到及时有效的控制和净化。本研究拟制备具有鉴别诊断作用的新型菌蜕疫苗,以期为沙门菌病的预防和净化提供帮助。研究内容如下:1.鸡白痢沙门菌pagC基因缺失株菌蜕疫苗的制备本研究旨在鸡白痢沙门菌pagC基因缺失突变株的基础上,制备具有鉴别诊断作用的新型菌蜕疫苗。优化了菌蜕灭活效果的检测方法,通过更严谨的菌落计数将菌蜕制备条件确定为用50 μMMAP处理OD=0.3的菌液1h以上。另外利用普通光学显微镜及透射电子显微镜观察菌蜕形态,荧光显微镜检测核酸残留等方法对获得的菌蜕进行进一步的评价。结果显示本研究中制备的菌蜕灭活效果可达99%,菌蜕保持完整的细胞形态,内容物大量释出,核酸残留水平较低。由上可知,本研究成功制备了鸡白痢沙门菌pagC基因缺失株菌蜕,与佐剂混合后可用于后续免疫保护效果评价。2.鸡白痢沙门菌pagC基因缺失株菌蜕疫苗的免疫效果评价本研究旨在评价制备的菌蜕疫苗对不同血清型沙门菌的交叉保护效果。首先建立了鸡白痢沙门菌CVCC1800,肠炎沙门菌ATCC19585和鼠伤寒沙门菌CVCC542三株不同血清型沙门菌的小鼠感染模型。将3-4周龄的ICR小鼠分为菌蜕组、甲醛组和PBS对照组进行疫苗接种,免疫剂量为108CFU/只。免疫分3次进行,每次间隔14天。首免前和免疫后第13天采集小鼠血清,用间接ELSIA检测小鼠血清中的抗体效价,同时根据已建立的基于PagC蛋白的沙门菌抗体ELISA检测方法评价疫苗的鉴别诊断效果。三免后用鸡白痢沙门菌、肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌攻毒,绘制小鼠存活曲线并观察脏器组织病变,在建立的三株不同血清型沙门菌小鼠感染模型的基础上对评价菌蜕疫苗的保护效果。随着免疫次数的增加,菌蜕组和甲醛组小鼠血清的抗体效价显著升高。同免疫批次间血清的检测结果显示,菌蜕组和甲醛组小鼠之间的血清抗体水平差异不显著（P＞0.05,ns）。甲醛灭活苗针对上述三种血清型沙门菌的保护率分别为75%、100%和100%,菌蜕疫苗则分别为25%、100%和100%。组织HE染色结果表明,相较于PBS对照组,菌蜕组和甲醛组小鼠脏器无病变或病变程度轻微。菌蜕疫苗用于鉴别诊断的效果评价结果显示,基于PagC蛋白的沙门菌抗体ELISA检测方法测得疫苗免疫组血清数值比阴性血清略高,但明显低于阳性血清OD450nm值2.7959。由上可知,本研究制备的菌蜕疫苗在保护机体的同时,能够一定程度上区分人工免疫和自然感染,为沙门菌的净化工作提供参考。