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目的:(1)探索兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)不同提取方法对BMSCs生长及传代的影响;(2)探索兔耳增生性瘢痕动物模型的可行性,并分析可能的影响因素,以提高造模成功率;(3)研究BMSCs对兔耳增生性瘢痕的预防作用效果。方法:(1)出生25~30天日本大耳白兔2只,获得股骨、胫骨骨髓后,分别采取全骨髓差速贴壁法、梯度离心法、红细胞裂解法和梯度离心联合差速贴壁法分离BMSCs,比较每种分离方法P0代培养、P3代生长曲线及冻存复苏率差异,并对所获BMSCs进行免疫学和多向分化能力鉴定;(2)成年日本大耳白兔12只,每侧兔耳腹侧面均行4个直径为1.0 cm全层皮肤缺损创面,观察造模成功率,分析影响造模成功率的因素;(3)成年日本大耳白兔24只,随机数字表法分为两组:BMSCs组和磷酸盐缓冲液组(PBS组),每组12只。于手术当天及术后第10天,BMSCs组每个创面周围注射1ml浓度为1×10~6/ml的BMSCs,PBS组注射1ml PBS溶液。观察两组创面愈合时间、再上皮时间、瘢痕高峰时间、瘢痕高峰持续时间,以及创面愈合后第7、14、21、28天两组瘢痕颜色、瘢痕面积、瘢痕指数、肉眼观及超声检查结果差异。结果:(1)梯度离心联合差速贴壁法提取BMSCs与全骨髓差速贴壁法、梯度离心法、红细胞裂解法比较,能提高P0代增殖速度,在传代、冻存细胞复苏成活率方面,四种方法无明显差异(P>0.05)。(2)对所获细胞进行表面抗原及免疫荧光检测发现,细胞表面CD29、CD71、CD106表达阳性,CD45表达阴性,符合BMSCs表面抗原特点,并且在特定条件诱导下可成骨、成脂分化。(3)兔耳增生性瘢痕动物模型建模成功率为78.13%,皮肤缺损创面位于兔耳腹侧面中1/3、尽量剔尽软骨膜并保持软骨完整性可提高造模成功率。(4)与PBS比较,BMSCs能改善兔耳增生性瘢痕颜色(P<0.05)、减少瘢痕形成;(5)BMSCs不能缩短兔耳全层皮肤缺损愈合时间(P>0.05)、再上皮化时间(P>0.05)、瘢痕高峰出现时间(P>0.05)及高峰持续时间(P>0.05)。(6)肉眼观及超声检测均显示干细胞治疗组兔耳瘢痕组织较对照组小。结论:梯度离心法结合差速贴壁法较常规的全骨髓差速贴壁法、梯度离心法及红细胞裂解法分离BMSCs能提加快P0代增殖速度;四种分离方法在BMSCs传代及复苏成活率方面无明显差异;兔耳增生性瘢痕模型制作过程中,皮肤缺损创面位于兔耳腹侧面中1/3、尽量剔尽软骨膜,并保持软骨完整性可提高造模成功率;BMSCs能改善兔耳增生性瘢痕颜色、减少瘢痕形成;BMSCs不能缩短兔耳全层皮肤缺损愈合时间和再上皮化时间。BMSCs对增生性瘢痕高峰出现时间及高峰持续时间方面也无明显影响。