论文部分内容阅读
许多植物多糖已被证实具有调节人或动物免疫应答的生物活性,研究表明苹果多糖(Malus pumila polysaccharide)是由许多相同或不同单糖连接而成的多聚物化合物,具有抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、抗炎、减缓疲劳等多方面生物活性,但目前关于苹果多糖对免疫应答调节作用的研究较少。本研究采用MTT比色法检测不同浓度苹果多糖对RAW264.7小鼠巨噬细胞活力的影响;应用Agilent SurePrint G3 Mouse GE V2.0(8*60K,Design ID:074809)基因表达谱芯片研究苹果多糖对RAW264.7小鼠巨噬细胞基因表达谱的影响;应用实时荧光定量PCR对8个基因表达谱芯片分析筛选出的差异基因进行了定量分析;采用Western Blot技术研究了苹果多糖对RAW264.7小鼠巨噬细胞iNOS,p105等蛋白表达的影响;同时应用微量法NO检测试剂盒测定了苹果多糖对RAW264.7小鼠巨噬细胞NO产生的影响。以期探究苹果多糖对机体免疫功能的调节作用,实验结果如下:1.苹果多糖溶液浓度在20-80μg/m L时,对RAW264.7小鼠巨噬细胞的增殖起到促进作用,而当苹果多糖溶液浓度高于或等于160μg/m L时,对RAW264.7小鼠巨噬细胞的增殖产生抑制作用;2.基因表达谱芯片扫描数据结果经分析后筛选出1597个差异基因(Fold Change>2,p<0.05),Go分析表明苹果多糖可能通过影响RAW264.7小鼠巨噬细胞内广泛分布的靶位点,从而影响巨噬细胞的炎症反应、天然免疫应答以及影响巨噬细胞参与特异性免疫应答和病毒防御过程;3.KEGG Pathway分析结果表明,苹果多糖能通过RAW264.7小鼠巨噬细胞表面相关受体影响TNF信号转导通路及NF-κB信号转导通路,从而激活巨噬细胞的免疫应答功能,促进参与免疫应答、炎症反应的细胞因子或趋化因子的mRNA转录水平上调,从而发挥其对巨噬细胞的调节作用。实时荧光定量PCR对8个与TNF、NF-κB信号转导通路相关基因相对表达量分析结果与基因表达谱芯片结果全部吻合,证明了基因表达谱芯片检测结果的准确程度和可靠性;4.Western Blot实验结果表明,苹果多糖能显著提高RAW264.7小鼠巨噬细胞iNOS的表达。通过检测不同浓度苹果多糖对RAW264.7小鼠巨噬细胞NO产生的影响,证实了苹果多糖通过上调iNOS表达促进巨噬细胞产生NO的活性。综上所述,本研究证实了苹果多糖可以促进RAW264.7小鼠巨噬细胞增殖,通过激活NF-κB信号转导通路及TNF信号转导通路影响RAW264.7小鼠巨噬细胞免疫活性,促进RAW264.7小鼠巨噬细胞iNOS蛋白表达并提高RAW264.7小鼠巨噬细胞NO的产量。