研究背景慢性肾脏疾病是世界性的大众健康问题，其与心血管疾病的发病率和死亡率升高密切相关。慢性肾脏疾病并发心血管疾病的危害日趋严重。慢性肾脏病患者心肌梗死的发生率是正常人的2倍。所以，防治慢性肾脏疾病对心血管系统的损伤是必须解决的首要课题。脂联素是一种脂肪来源的30kDa细胞因子，具有降低炎症反应、促进能量代谢、以及保护心血管的作用。脂联素在血液中主要存在形式有：脂联素三聚体、全长脂联素、高分子量脂联素。在常见疾病如：高血压、冠心病等中，血清脂联素水平较低。以往研究证实：MI/R后脂联素水平下降，且脂联素通过减轻氧化/硝化应激保护I/R心肌。然而，慢性肾功能不全患者血浆脂联素水平升高，肾功能不全伴发的心血管并发症的发病率和死亡率也明显升高。到目前为止，脂联素对慢性肾脏疾病并发心血管疾病的作用及机制没有阐明。研究目的⒈观察肾功能不全小鼠动物模型血、尿脂联素的动态变化及I/R对肾功能不全小鼠心肌的作用。⒉阐明脂联素对肾功能不全小鼠I/R心肌的作用及机制。研究方法⒈肾功能不全模型的建立：动物麻醉后，切除左侧2/3肾脏。完整保留肾上腺，将剩余的肾脏组织送回腹腔。动物恢复2周后再次麻醉，完整切除右侧肾脏。⒉小鼠心肌缺血再灌注模型的建立：小鼠经2%异氟烷麻醉后，用活结丝线结扎小鼠冠状动脉的前降支血管。30分钟后解开活结，心肌再灌注3小时(心肌凋亡检测)或24小时（心功能检测）。小鼠心肌缺血再灌注后，用预先置入的丝线再次结扎前降支，然后将2%伊文氏蓝注入小鼠左心室。⒊外源性补充脂联素方法：野生型小鼠和脂联素敲除鼠部分肾切除术后立即给予随机腹腔注射PBS或gAd(globular adiponectin,gAd)2μg/g,1次/天，连续7天。⒋生化检验：ELISA法检测肾功能不全小鼠的血、尿脂联素。第四军医大学西京医院检验科检验部分肾切除术后的血肌酐、尿肌酐、尿素氮、胱抑素、肌酐清除率和尿蛋白。⒌心功能、心肌梗死面积和心肌凋亡的检测：再灌注24小时后，小动物超声检测心功能。TTC/伊文氏蓝双染检测心肌梗死面积。TUNEL染色和caspase-3活性检测评价心肌细胞凋亡。⒍NO、硝基酪氨酸、超氧化物的检测：NO用硝酸还原酶法检测，硝基酪氨酸用ELISA法检测，超氧化物用光泽精法检测,DHE染色观察心肌超氧化物。⒎Western blot检测：Western blot检测心肌中的eNOS、peNOS、iNOS、AdipoR1、AdipoR2、pAMPK和AMPK。⒏免疫组化：免疫组化观察肾脏的脂联素及心肌中硝基酪氨酸。研究结果⒈成功建立肾功能不全模型：5/6肾切除术后，血浆肌酐、尿素氮、胱抑素、尿蛋白升高，肌酐清除率下降。提示成功建立了肾功能不全模型。⒉肾功能不全小鼠血、尿脂联素水平升高，肾脏脂联素减少：肾切除后术后24小时血脂联素开始降低，72小时达最低。1周后血浆脂联素逐渐升高，直至升高至4周。肾切除术后尿脂联素持续升高，肾脏脂联素减少。⒊肾功能不全小鼠MI/R损伤增加：与WT假手术小鼠MI/R后相比，肾功能不全WT小鼠MI/R后心功能降低，心肌梗死面积增加，心肌凋亡增加。⒋肾功能不全APN-KO小鼠MI/R损伤明显增加：与肾功能不全WT小鼠MI/R后相比，肾功能不全APN-KO小鼠MI/R后心功能明显降低，心肌梗死面积明显增加，心肌细胞凋亡明显增加。脂联素治疗的肾功能不全WT小鼠和肾功能不全APN-KO小鼠心功能改善、心肌梗死面积减少、心肌细胞凋亡减少。⒌肾功能不全小鼠上调心肌中iNOS的表达，增加NO的产生：肾功能不全WT小鼠心肌中NO增加，肾功能不全APN-KO小鼠心肌中NO明显增加。究其原因在于：心肌中iNOS的表达上调，peNOS表达减少。脂联素治疗后生成减少。⒍肾功能不全小鼠心肌中O-2和硝基酪氨酸增加，脂联素治疗后减少：肾功能不全WT小鼠心肌中O-2和硝基酪氨酸增加，肾功能不全APN-KO小鼠心肌中O-2和硝基酪氨酸明显增加，脂联素治疗后减少。⒎肾功能不全小鼠心肌中脂联素受体表达的变化：肾功能不全WT小鼠心肌中AdipoR1和pAMPK表达减少，肾功能不全APN-KO小鼠心肌中AdipoR1和pAMPK表达明显减少，脂联素治疗后逆转。AdipoR2表达没有变化。结论⒈慢性肾功能不全心肌I/R损伤敏感性增加与APN/AdipoR1/AMPK信号通路的下调和心肌氧化/硝化应激增加有关。⒉补充的外源性脂联素对肾功能不全心肌具有保护作用。