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1背景和目的肝移植术后患者均需以免疫抑制剂抗排斥治疗。肝癌肝移植术后肝癌复发是影响患者生存率的最重要因素。目前研究提示，肝癌肝移植术后免疫抑制剂使用与肝癌复发相关，但机制不清。国内外文献报道Yap基因与肝肿瘤的发生发展密切相关，我们课题组初步实验首次发现Yap基因可能参与免疫抑制剂对肝癌复发作用的影响。本研究以肝癌细胞系SK-hep-1为细胞模型，选取他克莫司(FK506)、环孢霉素A(CsA)及雷帕霉素(RAP)3种免疫抑制剂作为干预药物，运用MTT，流式细胞分析, Yap基因定点沉默、Western blot、Real-time PCR等技术手段，研究Yap基因在免疫抑制剂对肝肿瘤细胞生长影响中的作用，从而为肝癌肝移植术后免疫抑制剂的合理选择，预防肝癌复发，以及转移提供理论依据。2研究对象肝癌细胞系SK-hep-1。购自美国模式菌种保藏中心(ATCC)。3研究方法3.1利用MTT法和流式细胞仪技术检测3种不同药物(他克莫司1000ng/ml，环孢霉素A600ng/ml及雷帕霉素100ng/ml)对肝癌细胞系SK-hep-1生长周期的影响；3.2siRNA技术将Yap基因沉默后,利用MTT法,流式细胞仪, Real-timePCR和Western Blot等技术，研究Yap基因在SK-hep-1肝癌细胞系生长周期中的作用；3.3siRNA技术将Yap基因沉默后，予以3种不同免疫抑制剂处理SK-hep-1肝癌细胞，通过检测肝癌细胞周期以及细胞免疫因子相关基因表达,研究Yap基因在免疫抑制剂对肝癌细胞生长的影响。本课题利用Student’t检验方法进行显著性检验统计分析，显著性检验标准为P＜0.05。4结果4.1MTT及流式细胞技术均得出他克莫司(FK506,1000ng/ml)和环孢霉素A(CsA,600ng/ml)促进肝癌细胞系SK-hep-1的增值;雷帕霉素(RAP,100ng/ml)抑制SK-hep-1细胞增殖；4.2沉默Yap基因显著抑制SK-hep-1肝癌细胞增殖，提示Yap基因促进SK-hep-1增值；4.3SK-hep-1细胞免疫因子IL2、B7H1、GM-CSF-1及IL8,在Yap基因被沉默后出现下调，提示yap基因参与细胞免疫基因调控；4.4他克莫司干预组,在沉默Yap基因前后，对SK-hep-1的增值无影响，提示Yap基因不参与他克莫司不参与其对SK-hep-1增值作用；4.5环孢霉素A对SK-hep-1的促进增值作用随Yap沉默而被阻断，提示Yap基因的存在起促进环孢霉素A对SK-hep-1的促进增值作用；4.6雷帕霉素抑制SK-hep-1增值，沉默Yap后，细胞生长抑制更明显，提示Yap基因可能对抗雷帕霉素抑制SK-hep-1细胞系生长作用。5结论免疫抑制剂对肝肿瘤细胞生长的调控具有多样性，他克莫司和环孢霉素A可促进肝癌SK-hep-1细胞系增值，而雷帕霉素抑制SK-hep-1细胞系增值；Yap基因参与免疫抑制剂对肝肿瘤细胞生长的调控，但作用不同。Yap基因可增加环孢霉素A而非他克莫司对肝癌细胞系SK-hep-1的增值作用；Yap基因对抗雷帕霉素抑制SK-hep-1细胞系生长。