参酮ⅡA治疗大鼠急性脊髓损伤HSP70神经元的表达

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目的:通过对Wistar大鼠给予尾静脉注射丹参酮ⅡA,采取改良Allens打击法建立急性脊髓损伤的老鼠模型,在造模后1h、2h、4h、8h分别运用免疫细胞化学方法观察脊髓HSP70神经元水平的变化,从而探讨丹参酮ⅡA治疗急性脊髓损伤可能存在的作用机理,为临床上应用丹参酮ⅡA治疗急性脊髓损伤提供一定的临床实验依据。  方法:将160只Wistar大鼠(雌雄不限,体重220g-250g)随机进行分组,一共四组:丹参酮ⅡA组(简称STS组)、甲基强的松龙组(简称MP组)、安慰剂组(简称NS组)、对照即不给药(简称NO组),每组各40只。MP组在造模前30分钟在尾静脉注射甲基强的松龙注射液,按30mg/kg的比例进行给药;STS组在造模前30分钟尾静脉注射丹参酮ⅡA注射液,剂量按0.5g/kg的比例进行给药;生理盐水组在造模前30分钟在尾静脉注射0.9%注射用生理盐水,比例按30mg/kg的剂量进行给药;对照组不做任何药物处理。采用甲氧氟烷吸入+1%戊巴比妥纳(2mg/100g)腹腔注射的复合麻醉方式对大鼠进行麻醉,采取Allens打击法建立急性脊髓损伤的老鼠模型,并在造模后的1h、2h、4h、8h分别取伤段及其邻近伤段的脊髓组织运用免疫细胞化学方法观察脊髓HSP70神经元水平的变化。  结果:将四组模型大鼠的脊髓组织采用免疫细胞化学方法观察脊髓HSP70神经元水平的变化,根据图片观察热休克蛋白70表达在4组急性脊髓损伤组织中显著存在,且各组HSP70表达趋势随着各个时段上升呈上升趋势,STS组、MP组、NS组与NO组数据对比明显,根据数据检验具有可比性。STS组MP组在伤后1h、2h、4h、8hHSP70的表达明显高于NS组和NO组(P<0.05)。STS组与MP组数据对比具有可比性。(1)阳性神经元HSP70的细胞在显微镜下是棕色的,是一个圆形、椭圆形或三角形,突起明显,背景浅棕色。NO组和NS组HSP70呈敖在分布的低水平表达;STS组和MP组HSP70则表达显著增强,多数色泽均匀,边界清楚,数目明显高于NO组和NS组。各组前角阳性神经元HSP70差异明显且分布集中,选择前角作为计数统计部位,而HSP70后角分布少量,中央管区域周围分布更少。(2) HSP70在各组的分布密度变化进行统计分析,其组内比较采取方差分析,显示:①急性脊髓损伤大鼠不做任何处理或给予生理盐水的情况下,热休克蛋白70表达没有差异(P>0.05)。②当注射丹参酮ⅡA或强的松龙时,脊髓组织中HSP70表达具有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。组间比采取T检验,其结果显示:①给脊髓损伤模型注射生理盐水和不给药时,对脊髓组织中HSP70表达是一致的(P>0.05)。②强的松龙治疗给脊髓损伤作用优于丹参酮ⅡA注射液(P<0.05)。  结论:本研究表明:1、脊髓损伤后各组的HSP70表达均呈增加趋势。STS组和MP组HSP70随时段上升阳性神经元细胞表达上升,亦呈连续性,但STS组数值虽低于与MP组数值,但具有可比性。所以二者在急性脊髓损伤后HSP70阳性神经元表达层面上具有相同作用。2、急性脊髓损伤过程中神经元受到损伤致使HSP70表达增高是产生应激性保护的一种标志,该标志在HSP70表达中对受损神经元起到保护作用,也使得HSP70在ASCI后表达增强。ASCI后机体同时发生了损伤性HSP70增加说明机体对损伤性刺激能够快速做出保护性反应。虽丹参酮ⅡA就HSP70表达层面与甲基强的松龙相同,但由于本课题限制及其他客观原因,尚未取得相关临床实验证实与之相同或接近的疗效,这也是我们今后继续研究方向。
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