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植物内生菌普遍存在于植物体中,由于其生活环境的特殊性,植物内生菌与宿主植物之间形成了一种共生关系。近年来的研究表明,植物内生菌具有抗菌、抗肿瘤、杀虫、抗病毒、抗氧化等活性。这使得植物内生菌成为人们寻找新型抗菌、抗肿瘤药物的重要资源。本课题主要是以具有抗菌活性的药用植物为分离材料,筛选具有广谱抗菌活性的植物内生菌,对活性菌株进行形态及分子生物学鉴定,以及对川黄檗内生真菌PE-S11生长条件进行优化。得到的实验结果如下:①采用本课题前期建立的表面消毒方法,从采集自重庆歌乐山、南山、贵阳等地的款冬、金荞麦等15种药用植物中,分离出了117株植物内生菌。其中内生细菌34株,内生真菌83株。有23株(8株细菌, 15株真菌)在体外不能生长。分离到的内生真菌在27℃条件下培养大多不产生孢子。②采用酒精沉淀法对植物内生菌发酵液进行预处理,结果94株内生菌中, 67株对一种或多种指示菌具有抑制作用;其中有11株对4种以上人畜病原菌有抑制作用;款冬内生真菌(TE-R7)、金荞麦内生真菌(FE-R9)和川黄檗内生真菌(PE-S11)对10种以上指示菌有不同程度的抑制作用。③参照《真菌鉴定手册》和《真菌分类学》,通过形态培养,显微观察和对三株内生菌做18S rDNA序列测定,比对发现,款冬内生真菌TE-R7与镰孢霉属(Fusrium sp.)的fusarium oxysporum f.cubense(EF590328)具有99%的同源性,与镰孢霉属的其他种相似性有98%-99%。为镰孢霉属(Fusarium),fusarium oxysporum f.cubense菌的不同菌株。金荞麦内生真菌FE-R9与镰孢霉属(Fusrium sp.)的fusarium oxysporum具有100%同源性,与镰孢霉属的其他种相似性有98%-100%,因此FE-R9为镰孢霉属(Fusarium),尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)。川黄檗内生真菌PE-S11与丛赤壳属(Nectria)的Nectria sp. GD507具有98%的同源性,与丛赤壳属其他种的同源性在96%-98%,PE-S11可能与丛赤壳属(Nectria)的Nectria sp.菌为同一个种。④对Nectria sp.菌株PE-S11生长条件进行优化。该菌在以马铃薯汁为基本培养基,27℃的培养温度,6.0-7.0的起始PH,30%的装液量,120r/min的摇床转速,2%的葡萄糖(或蔗糖)为碳源,0.3%的蛋白胨为氮源的条件下,培养7-9d。发酵液抗菌活性研究发现,丛赤壳属Nectria sp.菌株PE-S11对6种指示菌的抑制效果基本趋于稳定。