本文主要针对低分子肝素的质量标准进行研究。低分子肝素（LMWH，low molecular weight heparin）是一种新型肝素类抗凝药物，由普通肝素（UFH）经化学法或酶法降解而得的较低分子量的肝素组分或片段，分子量为3000~8000。与UFH相比，LMWH具有较高的抗血栓活性，且生物利用度高、体内半衰期长、口服易吸收、出血倾向小，未来大有逐步取代肝素之趋势。由于国内外LMWH类产品的生产厂家不断增加，LMWH类新药产品的研发和申报逐渐增多，临床适应症逐渐扩大，因此，把好LMWH的质量关尤为重要。但是，国家药典尚未收载LMWH，现行局颁标准（2005年颁布）有待完善与提高。本论文参考国外药典标准并结合我国LMWH产品实际情况对现行标准进行研究。本文主要分四部分，分别从LMWH的分子量及其分布、依诺肝素钠1,6-酐测定、杂质检查、效价测定四方面对现行质量标准进行研究与提高。第一部分，分子量及分子量分布。分子量及其分布是LMWH最重要的质控指标之一，它与活性的发挥密切相关。分子量及其分布的测定方法有多种，HPSEC法是目前质控最常用的方法。该方法是测定相对分子量的方法，需要分子量对照品，而目前我国没有LMWH分子量测定用国家对照品，质控多采用EP分子量对照品，因此，建立我国的LMWH分子量对照品意义重大。本文旨在为建立国家分子量对照品提供研究思路及参考数据，为下一步分子量对照品的建立提供研制基础。本课题研制思路是参照WHO对照品的宽分布标样的思路，采用EP对照品或光散射绝对法标定，分别建立依诺肝素钠、达肝素钠、那曲肝素钙的分子量对照品，这样使得样品测定仅使用单一示差检测器和GPC软件即可完成。本文分别采用HPSEC法和HPSEC-MALLS-RI法对所有样品的分子量及其分布进行了测定，对测定结果进行分类统计和比较，筛选出3种LMWH的分子量待标品，为下一步实验提供了数据参考。第二部分，依诺肝素钠1,6-酐测定。依诺肝素钠是其中一种LMWH，1,6-酐是依诺肝素钠的特征末端结构，USP32版附录开始收载该项，EP目前也拟定出该项草案，但我国还没有相关收载。本文参考USP35版附录方法及EP草案方法对色谱条件如色谱柱的选择及酶解条件如不同厂家肝素酶筛选、酶解时间、酶用量分别进行了考察，建立了依诺肝素钠1,6-酐测定方法，该方法为国内首次报道，为LMWH中依诺肝素钠的末端结构检查提供了依据。第三部分，杂质检测。现行质量标准中对于杂质项的检测方法不完善，检测灵敏度不高，对于残留溶剂未进行质控。为此，本文建立及完善了3种不同LMWH的杂质检测方法，为LMWH的质控提供了参考依据。第四部分，效价测定。效价测定是LMWH另一个重要的质控项目。抗Ⅹa因子及抗Ⅱa因子活性的作用是LMWH发挥抗凝作用所必需的。二者的活性以效价指标进行判定，效价值可通过生色底物法直接测定。由于现行质量标准的效价测定方法是未分类的LMWH的统一规定，限度仅满足EP或BP总则效价测定要求，未作分类规定。本文按现行标准测定了3种LMWH的抗Ⅹa因子及抗Ⅱa因子效价，考察了国内外原料及制剂的效价，对测定结果进行统计，为下一步的分类质控提供了数据参考，有助于规范和完善现行效价测定质量标准。综上所述，本文针对我国LMWH现行质量标准的不足从以上四方面对其进行研究，筛选出3种LMWH的分子量待标品，为LMWH国家分子量对照品的建立提供了研制思路及参考数据；建立了依诺肝素钠1,6-酐测定方法，该研究在国内尚未见报道；建立了工艺中残留溶剂及其他杂质的检测方法，使杂质检测方法更加完善；对3种LMWH抗Ⅹa因子及抗Ⅱa因子效价值进行分类测定，为完善LMWH效价测定方法提供数据参考；同时，根据以上研究拟定出3种LMWH原料及注射液质量标准草案。