目的:从细胞实验和动物实验两个角度观察阿维A酸(Acitretin)及其联合抗癌药物顺铂(DDP)对鼠B16黑色素瘤细胞增殖、分化的影响,初步研究阿维A酸治疗恶性黑色素瘤的作用及其机制,探讨其作用机制是否与阿维A酸影响survivin、Fas及VEGF的表达有关,从而为临床诱导分化治疗恶性黑色素瘤提供实验基础。方法:1体外实验:1.1体外培养恶性黑色素瘤细胞株B16,采用四甲基偶氮唑蓝(tetrzolium-based colorimetric assay, MTT)比色法检测不同浓度阿维A酸作用不同时间后对该细胞增殖的影响;光学显微镜观察细胞形态学改变。1.2采用MTT比色法检测阿维A酸与抗癌药物顺铂联合应用对恶性黑色素瘤细胞株B16的增殖抑制作用,采用金氏公式分析相互作用指数(q),评价联合后的作用,如q>0.85表示相加作用,q<0.85为拮抗作用。2体内实验:C57BL/6J小鼠50只,于右前肢腋下皮下注射浓度为1×10~6个/ml的B16黑色素瘤细胞悬液0.2ml建立荷瘤小鼠模型。小鼠随机分为5组,每组10只,分别为阴性对照组,阿维A酸低剂量组,阿维A酸高剂量组,顺铂组及联合治疗组。于皮下接种瘤细胞第二天开始给药,用药共21天,每天观察小鼠的状态,每3天测量一次瘤体积,最后一次给药24小时后将小鼠处死,剥瘤称重,计算抑瘤率。将肿瘤组织沿最大面剖开,常规固定并进行HE染色及形态学观察。免疫组化染色观察药物对survivin、Fas及VEGF在瘤组织中表达的影响。运用统计软件SPSS12.0对数据进行统计分析。结果:1体外实验:1.1 MTT比色法显示:阿维A酸(0.1μmol/L、1.0μmol/L、10μmol/L和100μmol/L)对B16细胞增殖均具有抑制作用。不同浓度阿维A酸处理细胞24-72h后,与对照组相比,各处理组OD值均有不同程度下降,差异具有极显著性(P<0.01)。且随阿维A酸处理浓度的增大、作用时间的延长,OD值逐渐下降,阿维A酸对B16细胞的增殖抑制率也逐渐增大。1.2光镜下观察细胞形态结果显示:阴性对照组细胞贴壁生长良好,细胞呈梭形,透明,折光性好,细胞生长活跃。而用药组细胞皱缩,破裂,呈不规则形,有的细胞两端出现细长的伪足,细胞胞浆中出现空泡,脱落细胞增多。1.3 MTT比色法分析阿维A酸联合顺铂对B16细胞的增殖抑制作用,结果显示:金氏公式分析相互作用指数q值均大于0.85,即0.1、1.0、10、100μmol/L的阿维A酸可增强顺铂对B16细胞的增殖抑制作用,且随阿维A酸浓度的增大,其对顺铂的协同作用逐渐增强。2体内实验:2.1瘤体积-时间生长曲线:各治疗组小鼠肿瘤生长速度始终低于对照组,阿维A酸高剂量组、顺铂组和联合给药组抑制作用尤为显著。2.2瘤重、瘤体积及抑瘤率:阿维A酸低、高剂量组、顺铂组和联合给药组的平均瘤重均低于阴性对照组,抑瘤率分别为:26.94%、42.74%、60.64%和74.14%,与对照组比较差异有显著性(P<0.05)。各治疗组平均瘤体积和抑制率也明显低于对照组,与对照组比较差异有显著性(P<0.01)。2.3 HE染色观察瘤组织:对照组瘤组织边界不清细胞密集排列,异型性明显,而治疗组瘤组织中心及边缘可见不同程度的大片状或灶性坏死。2.4免疫组化结果显示:各治疗组的survivin,VEGF表达均低于对照组(P<0.05),Fas的表达均高于对照组(P<0.01),表明各治疗组能显著抑制凋亡基因survivin和VEGF的表达,上调促凋亡基因Fas的表达。且各治疗组Survivin的表达与Fas的表达呈负相关(rs=-0.766,P<0.01),与VEGF的表达成正相关(rs=0.724,P<0.01)。结论:1阿维A酸对鼠B16恶性黑色素瘤细胞具有增殖抑制及诱导分化的作用,为临床MM的治疗和化学预防提供了新的思路和理论依据。2阿维A酸在一定浓度和时间范围内对B16细胞增殖的抑制作用呈现量效相关性和时间依赖性。3阿维A酸可强化顺铂诱导B16细胞凋亡,推测阿维A酸可能增强B16细胞对化疗药的敏感性。4阿维A酸对鼠B16黑色素瘤移植瘤生长有显著的抑制作用,且呈一定的量效关系。5阿维A酸对鼠B16黑色素瘤的抑制作用与其下调抑凋亡基因survivin、上调促凋亡基因Fas的表达及抑制VEGF的表达有关。这可能是其抗肿瘤增殖和促癌细胞分化的机理之一。