拟果蝇细胞系建立及6种果蝇PVR基因的分子系统学研究

来源 :湖北大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:krist2009
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拟果蝇细胞系的建立:以拟果蝇早期胚胎为材料,采用常规方法获取发育4-6h的果蝇胚胎细胞,用改良的M3(BF)培养液体外培养,经50d左右的原代培养,当小细胞长满培养皿后进行传代培养,以后平均每隔10d传代一次。在细胞系传至10代左右时按照细胞系建立标准检测细胞系的一系列生物学特性。结果显示:24h后细胞贴壁,开始分化,先后依次观察到肌肉细胞,神经细胞,脂肪细胞,鳞状上皮细胞,血囊细胞的分化。2个月后所有这些分化的细胞都逐渐消失,只剩下生长较为一致的圆形小细胞。当圆形小细胞长满培养皿时进行传代。经液氮冻存的细胞复苏后活性达90%以上。细胞维持体外生长将近2年,传至60代,是一株成功的拟果蝇细胞系,命名为LJY-SIM。   6种果蝇PVR基因的分子系统学研究:通过PCR扩增和克隆测序的方法,获得了黑腹果蝇种亚组内的6个种的PVR基因的序列。以细针果蝇(Drosophila eugracils)为外群,运用邻接法,最大似然法和贝叶斯法三种方法构建了melanogaster种亚组的系统进化树,对其系统发育关系进行了分析,并利用bootstrap对分析结果进行了置信度检验。分子进化分析表明:这个基因的编码区段高度保守,明显表现出受到纯化选择的痕迹,其超高的Ks/Ka比值及GCIII含量都充分显示如此。而这个基因的内含子区存在明显的插入和缺失,包含有丰富的进化信息。基因树表明:D.melanogaster最先分化出来,然后是D.simulans和D.mauritiana,接着是,它们聚为单独的一个亚支系,D.erecta,D.teissieri和D.yakuba聚为第二个亚支系,其中D.erecta先分化出来。
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