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脂肪组织的发育包括脂肪细胞的增殖与分化,其生长各个阶段受诸多内外因子调控,如内源性的胰岛素以及外源环境。研究表明,从中草药王不留行的种子中提取的黄酮类化合物王不留行黄酮苷(Vaccarin)可以促进血管生成。此外,王不留行黄酮苷也参与了肝脏中葡萄糖及脂代谢紊乱等重要生物学过程的调控。多项研究发现脂肪细胞分化可以加速伤口愈合。王不留行黄酮苷是否调控脂肪细胞的增殖与分化,以及伤口的愈合目前尚不清楚。本研究利用王不留行黄酮苷处理3T3-L1脂肪细胞,探究其对3T3-L1细胞的增殖、迁移及分化的影响,阐明王不留行黄酮苷在脂肪细胞发育中的调控作用,并初步探讨了其调控机制,解析了王不留行黄酮苷利用脂肪细胞的聚集促进伤口愈合的机理。主要获得以下结果:1.王不留行黄酮苷对3T3-Ll脂肪细胞增殖的影响。0、50、100μM王不留行黄酮苷处理3T3-L1细胞24 h,通过CCK-8试剂盒检测发现,与对照组相比不同浓度的王不留行黄酮苷处理对细胞无毒副性(P>0.05);通过EdU染色发现100μM王不留行黄酮苷处理后与对照组相比,EdU阳性细胞率无显著性差异(P>0.05),表明其对3T3-L1细胞的增殖无显著影响。通过细胞划痕试验发现100μM王不留行黄酮苷处理3T3-L1脂肪细胞24 h后不能加速细胞的迁移从而加快划痕的恢复。2.王不留行黄酮苷对3T3-Ll脂肪细胞分化的影响。100μM王不留行黄酮苷处理3T3-L1细胞诱导分化至第6 d,油红O染色结果表明,王不留行黄酮苷显著促进脂肪细胞的分化(P<0.05)。RT-qPCR和Western blot检测结果表明,王不留行黄酮苷显著促进脂肪细胞分化相关基因和蛋白表达水平(P<0.05)。与此同时,王不留行黄酮苷显著激活PI3K-Akt信号通路(P<0.05)。3.王不留行黄酮苷通过GPR120促进3T3-L1脂肪细胞分化。100μM王不留行黄酮苷处理3T3-L1细胞,收集分化0、2、4、6 d的细胞,通过RT-qPCR检测发现王不留行黄酮苷处理组与对照组相比,GPR120基因mRNA表达水平显著上升(P<0.05);油红O染色结果表明,GPR120抑制剂(50 nM,AH7614)处理细胞显著抑制了王不留行黄酮苷促进脂肪细胞分化的作用(P<0.05)。Western blot检测结果表明,AH7614显著抑制王不留行黄酮苷对PI3K-Akt信号通路的激活作用(P<0.05)。4.王不留行黄酮苷通过脂肪细胞聚集促进小鼠皮肤伤口愈合。8周龄昆明白鼠,自由采食饮水。皮肤创伤试验发现与对照组相比,涂抹含有50μM王不留行黄酮苷(含5000 U青链霉素)甘油溶液的试验组在第7 d开始显著促进伤口愈合(P<0.05)(伤口面积显著减小)。取试验第12 d伤口处皮肤组织,进行石蜡切片、H&E染色发现王不留行黄酮苷加速伤口处皮肤组织有序排列,并且在伤口愈合处聚集大量的脂肪细胞。RT-qPCR检测发现,王不留行黄酮苷显著促进血管生成相关基因(Vegf、Fgf、Pdgfa、Igf)mRNA表达水平(P<0.05)。综上所述,王不留行黄酮苷通过GRP120激活PI3K-Akt-GLUT4信号通路,促进葡萄糖吸收,从而促进脂肪细胞分化。此外,活体试验证实王不留行黄酮苷可以通过促进血管生成相关基因的表达促进伤口愈合。