癞葡萄籽油甘油三酯结构及其体外抗肿瘤功效研究

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癞葡萄(MCV)是苦瓜的一个变种。癞葡萄籽油的主要成分是甘油三酯(TG, 85.43%),主要特征脂肪酸(FA)为共轭亚麻酸(CLn, 55.13%),所含三种CLn异构体以α-桐酸为主(51.54%);癞葡萄籽油是多种含CLn的TG的混合物。目前国内外对苦瓜籽油及其特征FA的抗结肠肿瘤的活性已作了大量研究,但迄今为止,关于苦瓜籽油中的TG的抗肿瘤活性研究仍为空白。人们普遍认为FA是油脂的抗肿瘤功效的最基本功能单元,完全忽略了油脂的TG层次对抗肿瘤功效的贡献;还认为TG在人体内一定先水解成游离脂肪酸(FFA)才被吸收利用,所以认为TG结构对其功效是不重要的,FA组成才是关键的。本论文比较了含CLn的MCVTG与FFA形式的CLn的抗某种肿瘤的功效,研究了含CLn的MCVTG的结构与抗肿瘤功效的关系。本论文分析了癞葡萄籽的化学组成,其中癞葡萄籽仁的含油率为32%;测试了癞葡萄籽油的基本化学性质;分析了癞葡萄籽油的FA组成,鉴定了主要特征FA。发现AOCS推荐的猪胰脂酶定向水解法和猪胰脂酶定向水解—2-溴苯乙酮衍生化—HPLC法不适于分析癞葡萄籽油的FA分布;癞葡萄籽油混合TG的13C-NMR分析揭示癞葡萄籽油中TG的sn-2位置主要由CLn占据。从桐油中分离得到纯的三α-桐酸甘油酯,补充了文献中缺少的由α-桐酸构成的AAA型TG的13C-NMR数据。癞葡萄籽油混合TG经NARP-HPLC分离,用APCI-MS进行初步结构鉴定,共分离鉴定出20种TG,TG中都含有CLn,以CLn占据sn-2位的TG为主;用HPLC分离制备的两个纯的癞葡萄籽油TG组分,再用13C-NMR法分析它们的FA分布,所得结果与APCI-MS结构鉴定结果一致。采用酶促酯交换法合成了结构预计为SSCLn的TG,它是癞葡萄籽油中的结构为SCLnS的TG的位置异构体,也用APCI-MS鉴定其结构,结果正如预计,证明了APCI-MS法鉴定TG结构的适用性。选择α-桐酸作为药物对照组,采用体外细胞培养方法,通过体外试验,考察了癞葡萄籽油混合TG和六组癞葡萄籽油分离TG对五种人体消化系统肿瘤细胞增殖的影响,初步探讨了TG的结构或组成与油脂的抗肿瘤功效的关系。六组不同MCVTG分别对5个人体消化系统的肿瘤细胞系的细胞增殖有大小不一的阻抗效果,除了对结肠癌细胞增殖的抑制作用不如α-桐酸外,癞葡萄籽油中含CLn的TG对另4个人体肿瘤细胞系的增殖抑制作用都比α-桐酸强,提示FFA状态的CLn比TG状态的功效弱。对正常肝细胞增殖虽有抑制作用,但强度不高;MCVTG及α-桐酸对肿瘤细胞的增殖的影响均有明显的量效关系,但时间-效应关系不明显。综合来看,结构为SCLnS的MCVTG抗人体肿瘤的活性最佳,且对多种肿瘤细胞增殖有抑制作用,尤其是在低浓度时对人胃癌细胞株SGC-7901、人口腔癌细胞KB和人肝癌细胞株Bel-7402作用显著,而SCLnS在MCVO中的含量较少。本文以MCVO或桐油为原料,在1, 3位特异性脂肪酶的定向催化下,利用酯交换反应使MCVO或桐油中的TG向SCLnS转化,并优化了酶促酯交换反应条件。SSCLn和SCLnS抗肿瘤功效的比较还不能证明CLn在甘油骨架上的位置与功效有关。MCVTG可能最终通过CLn起抗肿瘤作用,即CLn的脂质过氧化机制是MCVTG抗肿瘤的基础;但MCVTG这种CLn的甘油三酯形态可延缓CLn的氧化率,保护CLn的生理功能,从而最大限度地发挥抗肿瘤功效。从脂肪酸组成、TG组成与结构、相近组分对各细胞株的细胞增殖抑制作用等方面比较了MCVTG和桐油TG,有可能帮助我们认识MCVTG抗肿瘤的结构性因素,同时有可能促进开发桐油中含量巨大的α-桐酸资源。采用溶剂分提法(无水乙醇-正己烷混合溶剂)富集了结构为SCLnCLn的癞葡萄籽油TG组分,该组分占癞葡萄籽油TG的60%左右,可经NARP-HPLC分离纯化得到单一组分,对人胃癌细胞株SGC-7901增殖具有很强的抑制作用。
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