H5亚型禽流感病毒随着其不断进化、变异及对宿主的适应,部分毒株已经稳定存在并获得对其自然宿主的高致病力,这不仅严重危害到养禽业的发展,更对人类的公共卫生安全构成潜在威胁。H3N2亚型流感病毒具有广泛的感染宿主谱,除了可以感染野鸟和家禽外,还可以感染猪、犬、猫、雪貂等多种哺乳动物,而且是造成人的季节性流感最直接的病原之一。近年来的禽流感监测数据显示,H3N2亚型禽流感病毒不仅是水禽中分离率最高的流感病毒亚型之一,而且在我国大多数地区流行,病毒分离数目有逐年增多的趋势。为了解我国H5和H3N2亚型禽流感病毒的流行趋势,评估病毒对哺乳动物感染和传播的潜在风险,本研究选取2015-2016年分离到的66株具有代表性的H5亚型禽流感病毒和2009-2014年分离到的26株具有代表性的H3N2亚型禽流感病毒进行了病毒的遗传演化分析、抗原性分析、受体结合特异性分析、对小鼠的感染性和致病性分析以及H3N2亚型禽流感病毒在豚鼠中的复制和传播能力的分析。66株病毒的HA和NA亚型组合共有5种,即H5N1、H5N2、H5N3、H5N6和H5N8,其中以H5N6亚型禽流感病毒为主。病毒的遗传演化分析表明,66株病毒可划分为A、B、C、D和E共5种基因型,其中H5N1亚型禽流感病毒包括A1-A3基因型,H5N6亚型禽流感病毒包括D1-D16基因型,表明我国流行的H5亚型禽流感病毒具有明显的遗传多样性,且内部基因存在与H1、H5、H7、H9、H12等多种野鸟源的禽流感病毒、H3和H6等多种低致病性禽流感病毒的内部基因存在广泛的基因重排现象,此外,还与人源分离株H5N6或H7N9以及猪源H3N2亚型流感病毒的内部基因有着较近的亲缘关系。H3N2亚型禽流感病毒的遗传演化分析结果表明,26株病毒的基因型各不相同,病毒的基因来源具有明显的遗传多样性。HA基因与马源、人源和猪源H3亚型流感病毒的亲缘关系较远,内部基因则与野鸟源的多种不同亚型的低致病性,如H1N2、H1N9、H2N3、H6N6和H10N5等禽流感病毒的内部基因具有广泛的基因重排现象。此外,还有一些进化相对古老的基因片段与高致病性H5N1或H5N2禽流感病毒甚至是猪源H4N8流感病毒的基因片段存在着密切的亲缘关系。病毒的抗原性分析结果表明,clade 2.3.4.4分支的大部分病毒与我国当前所使用的Re-8疫苗株的反应性良好,少数病毒与Re-8疫苗株的抗原性存在一定差异。此外,clade 2.3.2.1分支病毒与我国当前所使用的Re-6疫苗株的抗原性存在较大差异,抗原性差异明显。除此以外,当前我国流行的H3N2亚型禽流感病毒已发生明显的抗原性漂移,与人源、猪源H3N2亚型流感病毒的抗原性差异明显。小鼠的感染性和致病性实验结果表明,66株H5亚型禽流感病毒均能在小鼠的呼吸系统内复制,在除鼻甲和肺脏以外的脑、脾脏和肺脏中选择性复制。66株病毒对小鼠的致病力具有显著性差异,A基因型病毒对小鼠呈现中、高2种致病力,B和C基因型病毒对小鼠呈现中、低2种致病力,D基因型对小鼠呈现低、中、高3种致病力,E基因型病毒对小鼠呈现高致病力。大部分H3N2亚型禽流感病毒不需适应就能够在小鼠的呼吸系统内有效复制,小鼠感染病毒后均不表现出明显的临床症状,病毒对小鼠均不致死,表现出对小鼠的低致病力。对HA蛋白的受体结合位点及其周围有氨基酸变化的10株病毒(2株H5N1、1株H5N3、6株H5N6和1株H5N8亚型禽流感病毒)进行受体结合特异性的分析,研究结果表明病毒的受体结合特异性不尽相同。所有的病毒均具有极强的与α-2,3-SA受体结合的能力,但与α-2,6-SA受体结合的能力则表现为不结合、微弱、中等和较强4种形式。挑选的10株H3N2亚型禽流感病毒均同时具备与α-2,3-SA和α2,6-SA受体结合的能力,尽管病毒与前者的结合能力更强。挑选在小鼠上呼吸道高效复制且具有与人型受体结合能力的5株病毒检测其在豚鼠中的复制能力、直接接触传播和呼吸道飞沫传播能力。豚鼠的复制实验结果表明5株病毒均能在豚鼠的呼吸系统内复制,传播实验结果表明,5株病毒均能在豚鼠间进行高效的直接接触传播,此外有2株病毒能在豚鼠间进行中等能力的呼吸道飞沫传播,有1株病毒能在豚鼠间进行高效的呼吸道飞沫传播。综上所述,当前我国流行的H5亚型禽流感病毒亚型组合多样,基因来源复杂,部分病毒与当前所使用的疫苗株抗原差异明显,且具有感染人的潜在风险,而H3N2亚型禽流感病毒具有感染人并在人际间传播的潜在风险。