脂肪酶催化合成甘油二酯的研究

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甘油二酯(DAG)是一种健康食用油.甘油二酯在人体内具有特殊的代谢特征和生理功效,使得近年来对甘油二酯的研究受到重视.2000年底,FDA经过安全审查将甘油二酯列入公认安全性食品行业.目前,国内尚缺完整的工业化生产甘油二酯的方法.该论文建立了一种含有甘油二酯的甘油酯的分析方法;系统的探索了一条适合工业化生产甘油二酯的工艺,在固定化脂肪酶的催化作用下进行油脂的甲醇解反应生产甘油二酯;探讨了分子蒸馏提纯甘油二酯的可行性.建立了一种利用高效液相色谱分析甘油二酯的方法.采用硅胶色谱分离柱,以正乙烷/异丙醇为流动相;方法的标准曲线具有良好的线性相关性,相对标准偏差为1.27﹪,加标回收率在98.4﹪~98.9﹪之间,测定结果与气相色谱测定结果对比接近;方法对甘油二酯的定性定量分析简便、准确、快速.筛选出了适合催化甲醇解反应生产甘油二酯的固定化脂肪酶LipozymeTL IM;并进一步研究了其催化玉米油甲醇解反应生产甘油二酯的工艺条件,结果为:在无溶剂体系中进行反应,反应温度60℃,反应达到平衡时间180min,摇床转速150r/min,油醇摩尔比1:0.8,一次性流加甲醇,加酶量5﹪,甘油二酯的产率为36.8﹪;在优化反应条件下,进行底物和酶的20倍量放大试验,实验结果与小试吻合;在优化条件下固定化脂肪酶Lipozyme TL IM催化玉米油甲醇反应,具有较好的操作稳定性;固定化脂肪酶Lipozyme TL IM经100℃加热6小时,仍能保持良好的催化活性,说明该酶在100℃内具有良好的热稳定性.通过对连续搅拌罐反应器和填充床反应器酶催化玉米油甲醇解连续化反应的实验结果比较,连续搅拌罐反应器比填充床反应器更适合固定化脂肪酶Lipozyme TL IM催化甲醇解连续化反应生产甘油二酯;酶的操作半衰期达到624小时,每克酶能催化反应的底物质量为5.66Kg.采用二级分子蒸馏工艺对甲醇解反应产物中的甘油二酯进行蒸馏提纯.在操作压力2.0Pa左右时,一级蒸馏操作温度为160℃,获得的甘油二酯纯度为47.6﹪,二级蒸馏操作温度为240℃,获得的甘油二酯纯度为82.5﹪,甘油二酯的提纯效果良好;如果对油脂组合物中甘油二酯的要求含量在50﹪左右或者更低,则通过一级分子蒸馏就能够达到要求.
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