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目的:观察当归红芪合剂超滤膜提取物对过氧化氢(H2O2)损伤人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的保护作用和内皮细胞凋亡相关基因在此过程中的作用,探讨其在心脑血管疾病治疗中的机制。方法:用200μmol·L-1 H2O2制造HUVEC损伤模型;按分组把不同浓度、不同分子量(5万分子量,10万分子量,20万分子量)的当归红芪合剂超滤膜提取物于损伤后加入,分别测定细胞活力(MTT法),观察当归红芪合剂超滤膜提取物对H2O2损伤内皮细胞活性的影响;实验分正常对照组、单纯药物组、H2O2损伤组、药物干预组,采用黄嘌呤氧化酶法检测细胞中SOD活力;采用硫代巴比妥酸(TBA)法检测丙二醛(MDA)活力;流式细胞仪技术检测细胞周期及细胞凋亡;化学法检测细胞内Ca2+浓度及细胞培养上清液中NO的浓度;应用RT-PCR和微阵列相结合的实验新技术―PCR Array‖检测与内皮细胞损伤相关的分子在各组间的差异表达;RT-PCR技术从m RNA水平检测各组与凋亡相关的基因的表达;Western Blot技术从蛋白水平检测各组凋亡相关基因的表达。结果:1.MTT结果显示:100、200、300μmol·L-1的H2O2分别作用ECV-304细胞6h、12h、24h、48h后细胞活性明显下降,与正常对照组比较有显著性差异(P﹤0.05)。200μmol·L-1的H2O2孵育6h,细胞活性值为正常对照组细胞活性值的一半(LD50),细胞损伤适中。2.不同浓度当归红芪合剂超滤膜提取物用药组与对照组之间MTT值有显著性差异(P<0.05);当归红芪合剂超滤膜提取物作用ECV-304细胞32h,在1.5g/L~21.0g/L浓度范围内有显著的促增殖作用。尤其以6.0g/L~15.0g/L浓度范围增殖作用达高峰。3.H2O2+当归红芪合剂超滤膜提取物5万、10万、20万分子量6.0g/L,与对照组比较有显著性差异(P﹤0.05);与H2O2损伤组相比有显著性差异(P﹤0.05),且以10万分子量6.0g/L的增殖作用最强;4.200μmol·L-1 H2O2作用ECV304细胞6h后可以明显降低SOD的活力,提高MDA的含量,与正常对照组相比具有显著性差异(P﹤0.05);药物干预组与H2O2组相比有显著性差异(P﹤0.05)。与正常对照组比较,H2O2损伤组细胞内Ca2+浓度明显上升(P﹤0.05);与H2O2损伤组比较,药物干预组细胞内Ca2+浓度明显下降(P﹤0.05)。5.与正常对照组比较,H2O2损伤组细胞凋亡率明显增加(P﹤0.05),细胞HSP70基因表达上调(P﹤0.05),e NOSm RNA表达下调(P﹤0.05),细胞培养上清液中NO含量降低(P﹤0.05)。与H2O2损伤组比较,药物干预组细胞凋亡率明显降低(P﹤0.05),细胞HSP70基因表达上调(P﹤0.05),e NOSm RNA表达上调(P﹤0.05),细胞培养上清液中NO含量升高(P﹤0.05)。结论:1.过氧化氢可以引起内皮细胞存活率下降,其中以200μmol·L-1作用6h细胞损伤适中。2.当归红芪合剂超滤膜提取物作用ECV304细胞32h,在1.5g/L~21.0g/L浓度范围内有显著的促增殖作用。尤其以6.0g/L~15.0g/L浓度范围增殖作用达高峰。3.当归红芪合剂超滤膜提取物对H2O2损伤后的内皮细胞有保护作用,其中以10万分子量,6.0g/L保护效果最为明显。且其保护作用可能是通过调节细胞周期参与了对ECV304增殖的影响。4.当归红芪合剂超滤膜提取物对H2O2致内皮损伤的细胞具有保护作用,其作用是通过提高SOD的活力,降低MDA的活力,减少细胞内Ca2+的释放,以及减少内皮细胞凋亡等机制来实现的。5.当归红芪合剂超滤膜提取物对H2O2引起的内皮细胞损伤有拮抗作用,具有抗H2O2致人脐静脉内皮细胞凋亡的作用,具有促进HSP70基因的表达,维持正常内皮细胞功能,上调e NOSm RNA表达,维持NO合成与分泌的作用。