食源性致病菌是指一类以食品、粮食等为传播介质的可以引起人类生病的病原体和病菌。本文主要是针对常见的可以引起人类疾病的细菌,重点关注副溶血性弧菌、单核增生李斯特氏菌和志贺氏菌。传统的方法是初步增菌培养,选择性培养基培养,分离纯化,然后利用其生化特点进行生化试验确认,方法比较繁琐,用时较长,而且准确性和灵敏度都不是很高。为解决这个问题,本试验利用核酸扩增技术,特异性的扩增目标菌的特异性序列,然后通过电泳的方式检测扩增的序列条带大小是否符合靶序列的大小。目前较为成熟的核酸扩增方法是PCR核酸扩增技术,但是PCR核酸扩增技术也有一些缺点,PCR核酸扩增技术需要目标序列在几个温度间切换,使碱基不断打开和连接,所以需要用到专门的PCR仪器,花费较高。滚环扩增技术是近两年兴起的恒温核酸扩增技术。滚环扩增技术具有特异性强、灵敏度高、恒温扩增的特点,极具研究和应用价值。本课题的目的是充分利用滚环扩增技术的特点,将这种检测技术应用到副溶血性弧菌、单核增生李斯特氏菌和志贺氏菌的检测中,开发一种新型的针对这几种致病菌的快速检测技术,改善和解决日常检测中遇到的问题。在本课题中,根据滚环扩增的原理,设计了特异性引物和锁式探针,锁式探针是滚环扩增技术中特有的技术,其原理是,在锁式探针的两端有与目标序列特异性结合的序列,这样就可以让锁式探针在与目标序列结合后形成环状,然后用DNA连接酶使锁式探针两端结合,这样就形成了一条环形单链DNA。然后用设计的引物与这条环状DNA结合,进行DNA核酸的扩增,这个过程只需要在一个温度下即可进行,最终得到所需的扩增序列,利用核酸电泳技术,观察到核酸的长度大小,据此判断扩增是否成功,如果扩增成功即证明核酸样品中含有目标菌的特异性序列,即证明检测的样品是阳性。研究结果显示本课题构建的RCA检测体系具有很好的特异性、灵敏度和稳定性,适用于副溶血性弧菌、单核增生李斯特氏菌、志贺氏菌和小肠结肠炎耶尔森氏菌检测和鉴定。并研制成可以应用的试剂盒。用试剂盒与传统方法相比较后发现,其具有如下几个优势：检测时间短、灵敏度高、准确性优异、试剂盒携带方便。