两种温度培养下松材线虫microRNA差异分析与mog-2基因功能探究

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松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)是引起松材线虫病的病原,被列为世界性检疫线虫,同时是我国重大林业外来入侵有害生物,给我国松林资源造成重大损失。高繁殖力是松材线虫的重要入侵机制,温度作为影响松材线虫多种表型的重要因素,松材线虫的调控因子microRNA如何响应温度调控基因进而影响松材线虫的表型值得研究。本试验对15℃和25℃培养下松材线虫的microRNA的特征进行了分析,并分析了性别决定基因mog-2基因的功能。主要结果如下:15℃与25℃持续培养条件下的松材线虫的microRNA的特征有明显差异,鉴定到松材线虫的198个microRNA中有18种microRNA仅在15℃环境温度下培养的线虫中表达,有37种microRNA仅在25℃环境温度下培养的线虫表达。15℃与25℃培养的松材线虫差异显著表达的microRNA有3个,对这3个microRNA进行了靶标基因预测,及相应的候选靶基因GO富集分析,这3个差异显著的microRNA主要参与关于线粒体的生物过程,如线粒体跨膜转运、线粒体运输、蛋白质靶向线粒体过程等,其KEGG富集分析的差异表现在钙信号通路、谷胱甘肽代谢、胞吞作用等。可以看出温度能够影响松材线虫microRNA的表达,microRNA表现出明显的温度响应特征。分析了调控松材线虫性别决定基因的microRNA,其调控性别决定基因的功能主要集中在细胞组分分化、生殖干细胞分化、细胞活动、性别决定、代谢活动、细胞组分形成、胚后形态发生、信号转导、精子形成等。分析25℃条件下显著下调表达的-lgi-mi R-34,该microRNA调控的基因通路,发现lgi-mi R-34可调控松材线虫剪接体通路,在此通路中性别决定基因mog-2在m RNA前体的剪接过程中发挥着重要功能。通过mog-2 RNAi发现,mog-2被干扰能够造成松材线虫蠕动缓慢,影响松材线虫取食,导致生长发育周期变长、雌雄比下降,并发生子宫及后阴子宫囊发生畸变。RNAi效果具有遗传性,表现出对子代表型有一定影响。认为mog-2参与了松材线虫的蠕动行为、取食行为、生长发育,并对松材线虫雌雄比有影响,在松材线虫子宫及后阴子宫囊的发育过程中起到重要作用。
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