论文部分内容阅读
研究背景辅助生殖技术（assisted reproductive technology，ART）给数以万计不孕症夫妇带来孕育胎儿的机会，然而肥胖不孕症患者接受ART时，易发生不良妊娠结局，表现为低卵巢反应性、低植入率、低妊娠率及高流产率，其造成不良妊娠结局的分子机制尚不清楚，目前也没有有效地预防治疗措施。近年来，氧化应激在女性生殖系统中的作用日益受到关注。因此，探索肥胖不孕症妇女接受ART时成功率低的机理，寻找改善肥胖不孕症患者ART妊娠结局的药物靶点，将有助于提高肥胖不孕症患者妊娠率，减少不良妊娠结局，提高ART质量。氧化应激（oxidative stress，OS）广泛存在于人体各个系统，与人类衰老、慢性非传染性疾病的发生密切相关。机体组织或细胞内氧自由基生成增加和(或)抗氧化能力降低，导致活性氧(reactive oxygen species，ROS)家族在体内或细胞内蓄积引起氧化应激。人体抗氧化系统有两类：一类为酶类抗氧化物，另一类为非酶类抗氧化物。近数十年的研究显示：氧化与抗氧化系统广泛分布于心血管、呼吸、神经、内分泌、免疫、泌尿、生殖等系统，参与机体多个脏器的生理病理过程。本课题组前期工作描述了氧化应激在子宫内膜异位症患者血清和卵泡液中的表达变化，发现子宫内膜异位症患者血清和卵泡液中氧化应激增强，抗氧化系统减弱，提示氧化应激在子宫内膜异位症患者生殖系统中可能发挥重要作用。ART的发展为研究人类卵子和胚胎的生存环境开辟了新途径。本研究拟对体外受精-胚胎移植（in vitro fertilization-embryo transfer，IVF-ET）肥胖患者血清、卵泡液、胚胎培养液中氧化应激标记物进行酶联免疫吸附法（enzyme linkedimmunosorbent assay，ELISA）检测，探寻OS在肥胖患者接受IVF-ET时的表达水平，以提供OS在肥胖不孕症患者接受IVF-ET中发挥作用的证据，寻找可能应用于临床的药物靶点和治疗靶点。研究目的检测OS标记物在肥胖不孕症女性血清、卵泡液及胚胎培养液的表达水平，并结合临床指标评价OS对肥胖不孕症女性IVF-ET结局的影响，初步探讨OS在肥胖不孕症女性生殖系统中的作用。材料与方法对2011年3月至2011年7月于广州医学院第三附属医院生殖中心、广东省妇幼保健院生殖健康与不孕症科因输卵管因素行体外受精-胚胎移植（IVF-ET）的94名患者进行前瞻性病例对照研究。根据世界卫生组织制定的亚洲人体重指数（body mass index，BMI）分类标准建议(低体重，BMI <18.5kg/m2；正常体重，BMI18.5-22.9kg/m2；超重，BMI23-24.9kg/m2；肥胖，BMI≥25kg/m2)对其进行分组，其中肥胖者（BMI≥25kg/m2）47例作为研究组，非肥胖者（BMI＜25kg/m2）47例作为对照组。两组患者均采用黄体中期长方案促排卵，于取卵日收集两组患者外周静脉血、卵泡液，移植日收集第三天胚胎培养液，采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定两组患者血清、卵泡液中活性氧（ROS）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）及维生素E（vitamin E，VE）及胚胎培养液ROS的浓度。对两组间的IVF-ET结局：获卵数、受精率、优质胚胎率、种植率、临床妊娠率、早期流产率进行比较，并结合OS标记物水平进行相关性分析。统计学方法：采用SPSS16.0软件对数据进行分析，符合正态分布的计量资料用x±s表示，采用方差分析；计数资料用率表示，采用χ2检验；实验数据与临床评价指标间关系用Spearman相关系数表示，采用相关性分析。P＜0.05为差异有统计学意义。结果1、ELISA技术证实研究组血清中ROS水平较对照组显著升高（P＜0.05），SOD和VE水平则较对照组显著性降低（P＜0.05）；研究组卵泡液中ROS水平较对照组稍升高（P＞0.05），SOD和VE水平较对照组显著降低（P＜0.05）；两组胚胎培养液中ROS含量均较低，两组间无显著性差异（P＞0.05）。另外，两组血清ROS水平均显著高于胚胎培养液中ROS水平（P＜0.05），研究组卵泡液中ROS水平也高于胚胎培养液中ROS水平（P＜0.05）（见表2.4、2.5)；两组血清SOD、VE含量显著低于卵泡液SOD、VE水平（P＜0.05）（见表2.4、2.5）。2、两组血清及卵泡液中ROS、SOD和VE水平以及胚胎培养液ROS水平与各IVF-ET结局评价指标之间均无显著相关性（P＞0.05），但同时也发现血清和卵泡液中ROS水平与受精率呈负相关趋势，与流产率呈正相关趋势；血清和卵泡液中SOD、VE水平与受精率、种植率和临床妊娠率呈正相关趋势，与流产率呈负相关趋势。结论研究组血清、卵泡液及胚胎培养液中ROS水平均升高，且血清、卵泡液中抗氧化剂水平均降低，表明氧化应激在肥胖患者体内确实存在。推论卵子质量可能受到氧化应激的影响，导致研究组受精率较对照组显著降低。ROS、SOD和VE作为肥胖患者行IVF-ET结局的预测指标，仍需进一步的研究。