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磁性微球作为一种新型的高分子功能材料在近几十年得到了充分地发展。特别是磁性微球在固定化酶领域的应用,解决了自由酶易于失活、分离困难、工业上难以应用等难题,使酶催化得以快捷、有效地用于工业大规模生产。制备催化能力强、稳定性好的磁性固定化酶,磁性微球外所包聚合物是关键。经过查阅文献发现聚乙烯醇对酶和蛋白质具有较高的结合能力。
采用分散聚合法,在Fe3O4磁流体存在下,通过PVA分子单体共聚制备磁性微球,并运用交联法以其作载体固定ALDC,该类微球未见文献报导。同时运用了XRD、TEM、IR spectra等多种手段对其进行了表征,主要内容如下:
通过比较磁性微球的磁响应性及粒径,考察了磁性微球制备的反应温度、搅拌速度、PVA用量和盐酸用量等操作因素对磁性微球性质的影响情况。结果表明,在70℃的操作温度,750rpm的搅拌速度,5mL9%PVA和0.5mL37%盐酸条件下制备出粒径在2.5×10-2~5×10-2μm之间,具有良好磁响应性,表面富含羟基和羧基等官能团的磁性PVA微球。
研究了固定化条件对磁性固定化酶活性及蛋白载量的影响,确定并比较了自由酶和固定化酶的最适应用条件和稳定性等理化性质。采用交联法制备磁性PVA微球固定化ALDC时最佳固定化条件为pH:6.0,ω(戊二醛):0.98%,给酶量:1.0mL/0.05g微球,此时所制磁性固定化酶有较高的催化活性。
将自由酶和磁性固定化ALDC在啤酒发酵过程中进行实验室范围的应用,固定化酶能有效地控制双乙酰含量,对双乙酰在发酵过程中的降解已基本达到自由酶对其降解的效果,同时固定化酶还兼具较好的热稳定性、存放稳定性和操作稳定性;其再生性好,使用效率高,可用于连续生产,降低生产成本;还可以在外加磁场作用下快速分离,适于大规模连续化操作。
因此,我们认为磁性PVA微球是一种可用于制备固定化酶的优良载体,将ALDC固定在磁性PVA微球上对ALDC的工业化应用具有很大的现实意义及实用价值。