猪传染性胸膜肺炎(Porcine contagious pleuropneumonia,PCP)是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)引起的以肺出血、坏死和纤维素性渗出为主要病变的高度接触性传染病。此病在世界范围内广泛流行,并给各国养猪业带来了严重的经济损失。本研究应用信号标签诱导技术(STM)构建APP1突变体库,期望获得影响APP1在动物体内存活的基因,为进一步研究基因组功能奠定基础。本试验以自杀性质粒pUT携带含有信号标签的Mini-Tn5转座子对猪胸膜肺炎放线杆菌血清1型菌进行转座诱变,构建了带有12对特异性信号标签的Mini-Tn5转座子的pUT自杀质粒,转化到供体菌E. coliβ2155后,利用双亲本滤膜杂交法与受体猪胸膜肺炎放线杆菌血清1型菌(APP1)进行接合转移,构建并优化了接合转移体系。利用抗性和营养缺陷培养平板筛选得到接合突变体,通过抗性通用引物与12个特异标签引物和ApxIV毒素鉴定引物分别对这些突变体进行了PCR。结果表明,通过接合转座的方式,可在大肠杆菌和APP1间进行杂交,并得到APP1的12个转座突变体库,共计421个突变体。从12个突变体库中随机挑取6个库,每个库中随机选取1个突变株,将其混合形成的库称为“接种库”(接种库中有6个突变株,分别为1-32、7-18、8-11、10-23、11-8、12-22),取等量的6种菌混合后鼻腔感染小鼠,试验组6只小鼠,感染的量为1.2~1.5×108cfu/只;阴性对照组3只,鼻腔直接灌入等体积PBS;阳性对照3只,攻APP1型菌,接种量为1.2~1.5×108 cfu/只。感染3、5、7天时,分别取攻毒组2只,阴性和阳性对照各1只,从肺脏中回收菌,并提取总基因组,然后利用ApxIV特异引物PCR鉴定APP1菌种特性,再利用6种特异标签F引物和通用引物,分别对总基因组进行PCR鉴定,对所获得的阴性菌株再利用基因组步移PCR方法扩增插入片段上游未知序列。结果表明,感染7天的小鼠能从肺脏中回收到菌,总基因组利用6种特异标签F引物和通用引物PCR鉴定,得到1-32和11-8两个阴性菌株,步移PCR也均获得到目的片段。