论文部分内容阅读
背景：冠心病(CHD)是最常见的一种心血管疾病,是多个基因和环境因素以及它们之间的相互作用导致的一种复杂的多因素疾病,目前仍然是世界范围内发病和死亡的首要原因。影响冠心病的危险因素众多,从遗传学角度出发研究基因多态性与冠心病的相关性,探究更多的冠心病危险因素,为冠心病的早期诊断和治疗提供多方位的论证越来越受到人们的重视。作为血管内皮系统相关基因,血栓调节蛋白(TM)既是一种跨膜糖蛋白,主要位于所有的静脉、动脉及毛细血管的内皮细胞表面,同时也可以作为一种依附于内皮细胞表面的凝血酶受体,主要由血管内皮细胞合成。在调节凝血和纤溶系统平衡的过程中发挥至关重要的功能,最终调节血栓形成。TM还可以可溶形式存在于血浆当中,即可溶性血栓调节蛋白(sTM), sTM血浆浓度不但可以作为血管内皮损伤的标志,而且与许多炎症相关性疾病存在一定的相关性。同时,机体内炎症因子和细胞因子的种类成千上万,其中高敏C反应蛋白(hs-CRP)是机体一种非常重要的炎症因子,它是一种反应非常敏感的急性时相反应蛋白,主要由人体肝脏合成,在众多可预测心血管疾病风险的炎症标记物中,hs-CRP是其中最有力的预测因子之一。目的：从遗传学角度出发,研究TM基因多态性与冠心病的相关性,发现冠心病的遗传危险因素,为早期发现、诊断及治疗冠心病做基础；研究sTM和hs-CRP血浆浓度与冠心病的相关性,并分析sTM和hs-CRP血浆浓度与冠状动脉病变范围的相关性和对冠心病的诊断价值,尽可能的发掘更多的冠心病危险因素,争取能为冠心病的早期发现、诊断及治疗提供更多的论据。方法：首先,研究者通过阅读相关文献,获得多个TM基因的单核苷酸多态性(SNPs),将研究相对较多的SNP进行荟萃分析指导筛选,进一步采用生物学信息分析的方法寻找可在中国汉族人群TM基因上定位的SNP,进而筛选出TM基因候选SNP。然后根据纳入标准和排除标准,收集2011年3月～2013年6月兰州大学第一医院心内科住院的冠心病患者和非冠心病患者,采用病例对照研究,收集受试者的动脉血提取DNA和血浆备用。基于sequenom飞行时间质谱法的基因测序技术,观察对照组和病例组间TM候选SNP位点基因型和等位基因频率是否存在差异。然后,基于酶联免疫吸附检测(ELISA)技术,检测所有受试对象的sTM和hs-CRP血浆浓度,观察sTM、hs-CRP血浆浓度在对照组和病例组间是否存在差异,并分析sTM和hs-CRP血浆浓度与冠状动脉病变范围的相关性及其对冠心病的诊断价值。结果：通过文献阅读和生物学信息分析法,选择了4个SNP:rs13306848G/A, rs1042579C/T,rs3176123A/C和rs1042580A/G。在对照组和急性冠脉综合征(ACS)组,rsl3306848G/A的GG基因型分别为128例(76.2%)和169例(84.1%),GA基因型分别为38例(22.6%)和31例(15.4%),AA基因型分别为2例(1.2%)和1例(0.5%)；rs1042579C/T的CC基因型分别为97例(57.7%)和131例(65.2%),CT基因型分别为66例(39.3%)和,63例(31.3%)TT基因型分别为5例(3%)和7例(3.5%)；rs3176123A/C的AA基因型分别为95例(56.5%)和125例(62.2%),AC基因型分别为66例(39.3%)和68例(33.8%),CC基因型分别为7例(4.2%)和8例(4%)。两组间rs13306848G/A、rs1042579C/T和rs3176123A/C位点分布差异均无统计学意义(P=-0.057,P=-0.143,P=-0.222),且对照组与ACS各亚组相比,此三个位点的分布差异亦无统计学意义(P>0.05)。rs1042580A/G的基因型分布不符合哈迪-温伯格(HWE)法则(P>0.05)。在基因多态性研究的样本基础上,随机抽取并添加了部分样本及稳定性心绞痛(SAP)作为阳性对照进行研究,结果显示各组间sTM血浆浓度均存在不同程度的统计学差异,其中ACS组>SAP组>对照组[(97.31±4.19)pg/ml＞(72.16±6.70)pg/ml＞(52.29±2.28) pg/ml,均P<0.05]；hs-CRP血浆浓度ACS组>对照组,且差异有统计学意义[(2.91±0.08)ug/ml＞(2.55±0.09)ug/ml, P=0.012],而对照组和SAP组、SAP组和ACS组间均无统计学差异(均P>0.05)；病例组的sTM和hs-CRP血浆浓度与冠状动脉病变范围不存在相关性(均P>0.05)；sTM和hs-CRP血浆浓度无相关性(r=-0.070,P=-0.116)；sTM和hs-CRP血浆浓度用于ACS的判断均有显著意义(P<0.001,P=-0.048)结论:TM rs13306848G/A、rs1042579C/T和rs3176123A/C多态性与急性冠脉综合征及其亚组均不相关；sTM和hs-CRP血浆浓度均可作为预测冠心病患者斑块稳定性的因子,且对急性冠脉综合征有一定的诊断价值,但均与冠状动脉病变范围不相关。