miR-92b-3抑制食管癌浸润转移机制研究

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细胞运动在肿瘤浸润转移过程中发挥重要作用。过去数十年的研究逐步表明:肿瘤细胞在浸润转移的过程中将会面临多种不同的微环境,而不同的微环境与运动中的肿瘤细胞之间存在密切的相互作用;这些相互作用诱导肿瘤细胞采用不同的运动模式来最终实现远端器官的转移。在目前被研究的多种运动模式中,Chemotaxis在肿瘤细胞局部浸润、远端转移过程中占有重要一席。在本实验中,考虑到肿瘤细胞在体内运动机制的灵活性和复杂性,我们因此从体外transwell模型入手来研究食管鳞癌细胞chemotaxis的调控机制。从1993年里被发现的第一个microRNA分子lin4开始,人们认识到这一大家族的非编码小RNA分子在多个物种的几乎所有生理功能和病理过程中发挥重要的转录后调控作用。在肿瘤的浸润转移过程中,多个microRNA分子的促进或抑制作用已经得到了充分的解析。但肿瘤自身遗传背景的异质性、微环境的影响和microRNA调控机制的复杂性导致这个领域中仍有诸多问题有待解决,因此,我们在本研究中将着重于探索调控食管癌chemotaxis的microRNA分子及其作用机制。我们利用transwell (CORNING, USA)建立了chemotaxis体外筛选模型,对食管鳞癌细胞株KYSE-30和KYSE-180进行四轮筛选,得到了运动能力有显著差异的细胞亚群:运动能力弱和运动能力强的细胞分别记为U和D。采用芯片技术(LCSCIENCES, USA)对两组细胞亚群(30-M-U/D-4和180-M-U/D-4)中microRNA分子的表达情况进行分析后,我们得到了多个差异表达的microRNA分子。后续的qRT-PCR、体外及体内功能试验从这些候选分子中确定了miR-92b-3p能够显著抑制食管鳞癌细胞的运动能力,但该分子并不影响细胞的增殖和凋亡。我们采用多个算法对miR-92b-3p的靶标分子进行预测,得到了多个与细胞运动密切相关的候选分子。随后多个试验证明了ITGA6和RAB23是miR-92b-3p的功能性靶基因,预示二者在食管鳞癌浸润转移过程中发挥重要作用。我们提取了28对食管鳞癌及其配对癌旁组织的RNA,检测其中miR-92b-3p、ITGA6、RAB23、ITGB1、ITGB4的表达情况。结果显示在这一组标本中,除ITGA6和ITGB4外,其余分子的表达在癌/癌旁中不存在统计学差异(p>0.05)。本研究首次发现miR-92b-3p抑制食管鳞癌细胞运动并进一步削弱其浸润转移能力。接着,我们对miR-92b-3p的作用机制进行了初步探讨。这些结果使我们能够更加深入了解microRNA分子如何调控食管鳞癌运动、浸润和转移,并为miR-92b-3p能否进入临床实践运用提供了初步的试验证据。
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