【摘 要】
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[目的] 利用抗IFN-α单克隆抗体的高度特异性,用针对IFN-α不同表位的单克隆抗体构建ELISA方案以检测IFN-α的含量;通过一系列的方法对ELISA方案进行优化,并将稳定的实验
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[目的] 利用抗IFN-α单克隆抗体的高度特异性,用针对IFN-α不同表位的单克隆抗体构建ELISA方案以检测IFN-α的含量;通过一系列的方法对ELISA方案进行优化,并将稳定的实验方法用于临床标本的检测。 [方法] 实验分为三部分:（1）抗IFN-α单克隆抗体的扩增、纯化及标记的研究;（2）抗IFN-α双单克隆抗体ELISA试剂盒方案的构建;（3）抗IFN-α双单克隆抗体ELISA试剂盒的临床研究。 [结果] （1）本研究采用体内扩增法在短期内就获得了含抗IFN-α的特异性单克隆抗体的腹水,通过系列浓度梯度饱和硫酸铵初纯,透析除盐,再使用SPA-sepharose CL-4B亲和层析柱进一步纯化,得到纯化优质抗体。用ELISA检测方法确定3D9B10,1A11D5,1A11C3单抗的效价可达104。用辣根过氧化物酶（HRP）和生物素N-羟基丁二酰胺酯（BNHS）分别对纯化抗体3D9B10进行标记,获得了HRP-3D9B10,Biotin-3D9B10,HRP标记率为0.593。用竞争抑制ELISA法来鉴定酶标抗体的特异性,研究结果表明随着竞争抗原浓度的增加OD450值随之减少,检测结果与竞争抗原浓度成一定的反比关系,说明HRP和BNHS成功标记到抗体上。标记抗体效价分别为1∶1600和1∶3200,较标记前抗体效价有所下降。 （2）抗IFN-α双单克隆抗体夹心ELISA方案的构建方法为:应用抗
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