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目的:C1orf63基因是一个新基因,表达一个功能未知的分子量为33kD的蛋白。截止到目前为止,尚未见C1orf63基因功能的相关研究报道。有研究表明:IL-2的缺失可使T淋巴母细胞的细胞周期改变,与此同时许多基因的表达发生改变,其中检测到C1orf63基因的表达升高[1],由此我们推测C1orf63基因可能对细胞的周期有影响。有关新基因功能的研究并没有一个固定的模式可循,但有一些基本的策略可以参考,比如研究其定位与表达分布、表达纯化基因产物、基因转染、基因的过表达、基因的干涉、基因敲除、筛选其相互作用蛋白等。在研究一个具体的基因时,须根据具体情况制定其功能研究的策略。为了对其生物学功能进行探索研究,本课题进行了以下四方面的探索研究。首先检测了C1orf63在肝癌和癌旁组织中的表达与定位,以及C1orf63在多种人肝癌细胞系和胃癌细胞系中mRNA表达水平及相关蛋白表达水平;然后采用RNA干扰技术对C1orf63基因进行干涉,检测干涉C1orf63后在胃癌细胞MKN28中的表达水平;尔后检测干涉C1orf63后对胃癌细胞MKN28的细胞周期、细胞增殖活力和细胞凋亡的影响;最后,本实验还构建了含C1orf63基因的重组载体pEGFP-N1-C1orf63,为进一步研究C1orf63基因的生物学功能奠定了基础。方法:免疫组化染色法检测C1orf63基因在肝癌和癌旁组织芯片中的表达与定位;Real-Time PCR和Western blot分别检测C1orf63基因在不同人肝癌和胃癌细胞中mRNA和蛋白水平的表达;设计并合成C1orf63基因的干涉片段,脂质体转染法将有效干涉片段转染至人胃癌MKN28细胞中;Real-Time PCR和Western blot法鉴定干涉C1orf63基因后干涉效果;流式细胞术检测C1orf63基因干涉后对人胃癌细胞MKN28细胞周期和细胞凋亡的影响;MTT法检测C1orf63基因干涉后对人胃癌细胞MKN28细胞增殖活力的影响;采用PCR技术构建含C1orf63基因的重组载体pEGFP-N1-C1orf63。结果:C1orf63在肝癌和癌旁组织中都有表达,且为胞浆表达;无论是mRNA水平还是蛋白水平,C1orf63都在人胃癌MKN28细胞中表达量较高,在MKN45细胞中表达量较低。成功筛选出C1orf63的有效干涉片段。C1orf63干涉后,胃癌细胞MKN28发生G1期阻滞,经统计学分析,C1orf63干涉后细胞增殖指数降低(P﹤0.05);用MTT法检测到C1orf63干涉24h、48h、72h后,胃癌细胞MKN28的增殖活力下降,且48h时最为明显,与细胞周期结果一致;C1orf63干涉48h后,胃癌细胞MKN28发生晚期凋亡。成功构建了重组载体pEGFP-N1-C1orf63,双酶切鉴定结果正确,测序结果正确。结论:C1orf63基因在人肝癌和癌旁组织胞浆中都有表达,在胃癌MKN28细胞中mRNA和蛋白水平表达量最高;在MKN28细胞中干涉C1orf63后,可使细胞周期发生G1期阻滞,细胞增殖活力下降,48h时最为明显,而且促进MKN28细胞的晚期凋亡。这与文献中的推断C1orf63可能与细胞周期有关相符合。