【摘 要】
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目的CD151影响不同癌症中的各种信号通路,并能影响结肠癌的发生发展过程。然而,这些潜在的机制尚不清楚。本研究旨在全面评估CD151在结肠癌中的功能。方法用免疫组化(IHC)分析CRC患者80例CRC患者的CD151表达水平。通过MTT、划痕和Transwell实验分析了低表达CD151对HT29和HCT116细胞活力、迁移和侵袭的影响。构建结肠癌裸鼠移植瘤模型检测CD151在整体动物水平对结肠癌
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目的CD151影响不同癌症中的各种信号通路,并能影响结肠癌的发生发展过程。然而,这些潜在的机制尚不清楚。本研究旨在全面评估CD151在结肠癌中的功能。方法用免疫组化(IHC)分析CRC患者80例CRC患者的CD151表达水平。通过MTT、划痕和Transwell实验分析了低表达CD151对HT29和HCT116细胞活力、迁移和侵袭的影响。构建结肠癌裸鼠移植瘤模型检测CD151在整体动物水平对结肠癌的影响。RNA-seq技术鉴定在体内与CD151相关的基因。此外,进行了共免疫沉淀法(Co IP)和质谱法(MS)来识别与CD151相互作用的蛋白。进行实时荧光定量RT-PCR(q RT-PCR)、Western blot、GST-pulldown和Co IP验证相关蛋白与CD151的相互作用。利用分子对接技术将汉黄芩素与TGFβ1的三维结构进行分子对接,随之汉黄芩素作用于人结肠癌细胞利用q RT-PCR检测其对TGFβ1的抑制作用,最后汉黄芩素作用于过表达CD151的人结肠癌细胞利用q RT-PCR检测其对CD151的抑制作用。结果人结肠癌癌组织中CD151水平明显高于癌旁组织。在细胞水平上低表达CD151抑制人结肠癌细胞活力、迁移和侵袭。同时,在整体动物水平上低表达CD151抑制结肠癌裸鼠移植瘤模型。细胞组和裸鼠移植瘤分别进行RNA-seq显示低表达CD151显著改变了多个基因的表达。特别是随着CD151低表达TGFβ1和CEACAM6在体外和体内都随之下调,LGR5仅在体内下调。用q RT-PCR和Western bot对COIP-MS结果进行了验证。此外,用GST-pull down和免疫荧光法证实了TGFβ1、CEACAM6和LGR5与CD151的相关性。汉黄芩素在人结肠癌细胞中抑制TGFβ1激活剂引起的TGFβ1高表达作用,在过表达CD151的人结肠癌细胞中抑制CD151的m RNA水平。结论:低表达CD151可能通过TGFβ1介导来抑制CEACAM6、LGR5和Wnt通路,汉黄芩素对TGFβ1、CD151具有抑制作用。
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