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目的近年来糖尿病发病率逐年攀升,长期血糖增高导致大血管、微血管受损并危及心、脑、肾、周围神经、眼睛、足等。糖尿病足溃疡作为糖尿病严重并发症之一,其病程反复、难愈合且有极高的致残率,给患者和家属带来极大的痛苦和沉重的经济负担。40%-80%的糖尿病足溃疡会合并感染,会加重溃疡治疗的难度。随抗生素的不断泛用和滥用,多重耐药菌的出现致使感染越来越难以控制。糖尿病足溃疡周围血液灌流受阻,抗菌药物在溃疡面的药物浓度低,难以达到抗感染的效果。针对这一难题,本文旨在合成一种抗菌且不诱导细菌耐药性的新型水凝胶伤口敷料,控制溃疡面细菌感染,促进伤口的愈合。方法将半胱氨酸接枝天然碱性多糖壳聚糖(CS-NAc)和马来酸苷接枝葡聚糖(Dex-Ma)加入纳米银(AgNPs)溶液中,构筑出三维网状结构的抗菌水凝胶。通过红外光谱(FT-IR)和核磁谱图分析材料结构,运用扫描电镜(SEM)观察抗菌水凝胶的微观结构,并通过溶胀测试来分析材料亲水性能,细胞毒性测试来评估材料的生物相容性,LIVE/DEAD细菌荧光染色测试用以评估材料抗菌性能。进一步以糖尿病大鼠全层皮肤缺损感染伤口为模型,观察材料对感染伤口的愈合作用,并取伤口处肉芽组织做组织形态学分析和免疫组织化学检测,分析巨噬细胞因子特异性抗原CD68和标记T细胞的因子CD3,评估伤口处的免疫能力及对炎症的防御能力。结果实验测定巯基化壳聚糖巯基含量和马来酸葡聚糖取代度,通过调节巯基与马来双键的摩尔比,在一定浓度AgNPs溶液条件下,制备含纳米银的天然多糖水凝胶(AgNPs@CNDM)水凝胶。扫描电镜图显示凝胶具有孔洞大小均一的三维网络结构;在5 min内,该复合凝胶溶胀率可达到400%,利用其溶胀性,可以迅速吸收组织渗液,有利于伤口愈合;细胞毒性测试结果显示,与AgNPs相比,细胞与AgNPs@CNDM水凝胶浸出液共培养48 h后,细胞存活率均大于80%,这可能是该复合凝胶能起到缓释Ag离子的作用,从而改善纳米银毒性,改善材料的安全性。抗菌实验结果表明,AgNPs@CNDM对金黄色葡萄球菌和铜绿假单孢菌均具有显著的抗菌效果。在糖尿病大鼠感染伤口模型实验中,AgNPs@CNDM组不仅可以有效地抑制感染还可以加速伤口的愈合,组织形态学进一步证实AgNPs@CNDM水凝胶对糖尿病大鼠感染伤口的抗炎促愈合作用。免疫组织化学检测表明,AgNPs@CNDM水凝胶可以提高CD68和CD3因子的表达,能在炎症早期阶段激活巨噬细胞,抑制炎症控制感染,提高糖尿病大鼠伤口的局部免疫能力,加速伤口愈合。结论本文通过简单、便捷方法制备出的三维结构天然多糖复合抗菌水凝胶,该凝胶具有较好的溶胀性能,可保持创面的湿性修复环境,且具有优良的生物相容性,并能有效地抑制细菌的增殖,对免疫因子CD68和CD3表达具有上调功能,促进感染伤口的愈合,且不诱导细菌耐药的产生,为临床治疗糖尿病足溃疡感染提供新策略和新思路。