论文部分内容阅读
目的：1)观察不同浓度人抵抗素样分子-β（resistin-like molecule-β，RELM-β）对体外培养的人肺动脉平滑肌细胞中黏着斑激酶（focal adhesion kinase，FAK）、生存素（survivin）表达的影响；2）观察RELM-β、FAK、survivin三者之间的关系，探讨RELM-β调控FAK信号通路促进HPAMSCs增殖的机制。方法：取材肺癌周围的正常组织,体外培养至第5-6代。将细胞随机分为4组：control组（对照组），重组人RELM-β（recombinant human RELM-β，rhRELM-β）25ng/ml组，50ng/ml组，100ng/ml组。RT-PCR检测FAK及survivin mRNA表达水平。WB检测FAK及survivin的蛋白表达量，免疫荧光观察FAK在HPASMCs中的定位表达，PI单染流试细胞术检测细胞周期。同时，构建FAK和survivin的siRNA，分别转染至体外培养的HPASMCs内。RT-PCR分别检测FAK、survivin mRNA表达水平。以了解RELM-β对HPASMCs中FAK、survivin表达的影响，结果：与对照组比较,不同浓度rhRELM-β刺激HPASMCs，其FAK、survivin mRNA及蛋白表达均显著增高，于50ng/ml组最为显著（P <0.01)，与对照组比较差异有统计学意义(P <0.05)。rhRELM-β明显升高了HPASMCs S期细胞比例，同时降低了HPASMCs G0/G1期比例。FAK siRNA能下调HPASMCs survivin mRNA表达水平，而survivin siRNA未能下调HPASMCs中FAK的mRNA表达水平。结论：RELM-β促进人肺血管平滑肌细胞增殖的同时,也上调了HPASMCs中FAK、survivin的表达。FAK siRNA能抑制survivin在HPASMCs中的表达，反之不然，说明FAK在细胞增殖信号传导通路中位于survivin上游，且两者均在RELM-β诱导的HPASMCs异常增殖过程中发挥重要作用。目的:探讨FAK-survivin信号通路在RELM-β刺激下人肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用。方法:进行人肺动脉平滑肌细胞的原代培养。根据本实验室研究结果，选择rhRELM-β浓度(50nmol/ml)进行实验，探讨在相同浓度下的延时效应。将细胞分为2组：control组，RELM-β重组蛋白50nmol/ml组。于1、2、4、8h收集细胞，WB检测FAK和pFAK、survivin蛋白表达水平。于48小时流式细胞术PI单染法检测细胞周期的分布及FITC-AnnexinV/PI双染色双变量流式细胞分析细胞凋亡率。同时，构建FAK的siRNA，转染至体外培养的HPASMCs内以降低HPASMCs中FAK的表达，并以rhRELM-β刺激培养HPASMCs，实时定量RT-PCR检测FAK和survivin mRNA表达水平。Western blotting检测FAK和pFAK、survivin的蛋白表达水平。使用BrdU掺入法流式细胞术检测细胞增殖情况。结果:在体外培养的人肺动脉平滑肌细胞中，FAK siRNA有效抑制了RELM-β刺激培养的HPASMCs中FAK和survivin的mRNA和蛋白表达，并部分抑制细胞增殖。结论: FAK在RELM-β诱导的HPASMCs异常增殖中发挥重要作用，其部分原因是通过上调survivin的表达。