【摘 要】
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桑螟是桑树重大害虫之一,每年对我国蚕桑业造成严重损失。混腔室茧蜂是桑螟优势寄生性天敌,其寄生率高,控制效果持久。将其开发为桑园生防因子符合“绿色防控”方向。本研究以混腔室茧蜂—桑螟为寄生体系,探究混腔室茧蜂的逐日生殖力及子代适合度指标,解析混腔室茧蜂毒液蛋白基因种类及表达模式,明确毒液钙网蛋白在寄生过程中的功能,阐明桑螟被混腔室茧蜂寄生后免疫基因表达模式及和激素水平的变化,从而揭示了混腔室茧蜂对桑
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桑螟是桑树重大害虫之一,每年对我国蚕桑业造成严重损失。混腔室茧蜂是桑螟优势寄生性天敌,其寄生率高,控制效果持久。将其开发为桑园生防因子符合“绿色防控”方向。本研究以混腔室茧蜂—桑螟为寄生体系,探究混腔室茧蜂的逐日生殖力及子代适合度指标,解析混腔室茧蜂毒液蛋白基因种类及表达模式,明确毒液钙网蛋白在寄生过程中的功能,阐明桑螟被混腔室茧蜂寄生后免疫基因表达模式及和激素水平的变化,从而揭示了混腔室茧蜂对桑螟的寄生动态,以及毒液介导的寄生蜂调控寄主免疫反应的生理机制,为桑园治虫农药减施增效提供重要科学支撑,主要结果如下:1、为明确混腔室茧蜂的终生生殖力,测定了混腔室茧蜂对3龄桑螟幼虫的逐日生殖力及子代适合度。结果表明,母蜂逐日生殖力在寄生第4d及第5d达到峰值,逐日产出的子代蜂雌虫占比随寄生时序延长而逐渐升高,母蜂在寄生后期偏好产更多的雌性子代,但子代蜂的幼虫历期、茧历期、成功羽化率及寿命不受寄生时序及寄生时寄主体重影响,子代蜂的体型大小受寄生时寄主体重影响显著。2、为探究母蜂的毒液在混腔室茧蜂调控寄生蜂—寄主互作关系中的作用,首先明确了混腔室茧蜂毒液器官形态,继而利用转录组测序技术构建了混腔室茧蜂的毒腺转录组数据库,共组装得到14,646个unigenes,经功能注释,从中鉴定出钙网蛋白、肽聚糖识别蛋白、四跨膜蛋白和热激蛋白等经典的毒液蛋白基因,丝氨酸蛋白酶、海藻糖酶、漆酶、酚氧化酶等蛋白酶,以及丝氨酸蛋白酶抑制剂、Pacifastin蛋白酶抑制剂和Kunitz型胰蛋白酶抑制剂等蛋白酶抑制剂。随机选取5种毒液蛋白基因进行时空表达谱测定,结果表明,这些毒液蛋白基因均在毒腺组织中高度特异性表达。3、为揭示毒液钙网蛋白Ac CRT在混腔室茧蜂成功寄生桑螟中的作用,克隆出混腔室茧蜂钙网蛋白Ac CRT开放阅读框序列,分析其Coiled-coil结构域,原核表达并纯化野生型混腔室茧蜂钙网蛋白和缺失Coiled-coil结构域的突变型钙网蛋白。结果表明,Coiled-coil结构域能够显著提高Ac CRT抑制寄主免疫基因表达和包囊反应的能力;体外注射实验结果表明,野生型和突变型Ac CRT均能显著抑制寄主免疫基因表达,且野生型Ac CRT的抑制效果更为明显;体外包囊实验表明,野生型和缺失Coiled-coil结构域的突变型Ac CRT对寄主的包囊作用有明显的抑制效果,且野生型Ac CRT的抑制效果更加明显;构建e GFP-Ac CRT/Mutant融合表达体系,明确野生型和突变型Ac CRT能够准确识别并进入寄主桑螟的血细胞且野生型Ac CRT进入桑螟血细胞的能力更强。4、为探究桑螟被混腔室茧蜂寄生后,免疫相关基因的差异表达模式,从桑螟幼虫转录组中鉴定出包括热激蛋白在内的一系列免疫相关基因并探究其表达模式。结果表明,混腔室茧蜂寄生、高温和饥饿等逆境胁迫均能显著诱导桑螟热激蛋白基因Gp HSPs表达;Gp HSPs在低龄期幼虫中表达量较低,但是在预蛹期,滞育期和蛹期中高度表达,暗示Gp HSPs可能与桑螟的变态发育相关;精氨酸激酶、胰蛋白酶和C型凝集素等18个免疫相关基因的表达谱分析表明,混腔室茧蜂寄生能显著调控桑螟这些免疫基因的表达模式。
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