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目的:金樱子保健酒以金樱子、枸杞子、红枣、黑枣、党参为主要原料,辅以糯米,并以白酒作为浸提介质制成的滋补保健酒,在日常保健中可以用于抗疲劳、抗衰老、增强免疫力、改善睡眠和改善营养性贫血。本研究探索酒精度、药材用量、糯米和米酒比例、米酒度数对金樱子保健酒色泽口感的影响,优化其制备工艺;建立金樱子保健酒的质量标准;对金樱子保健酒的抗疲劳、耐缺氧和抗衰老作用进行验证,为今后产品的开发和推广应用提供科学依据。方法:(1)金樱子保健酒的制备:采用糯米发酵并与配方药材共同浸泡的特殊工艺技术,经过滤并消毒灭菌后制成金樱子保健酒;用单因素试验,探究酒精度、药材用量、糯米和米酒比例、米酒度数对金樱子保健酒色泽和口感的影响。(2)金樱子保健酒的质量标准:金樱子保健酒是以白酒为基酒,经添加可食用的辅料制成的配制酒,所以适用于蒸馏酒和配制酒的各项质量标准。参照“GB/T 5009.48-2003蒸馏酒与配制酒卫生标准的分析方法”、“GB2758-2005发酵酒卫生标准”、“GB 2757-81蒸溜酒及配制酒卫生标准”检测金樱子保健酒中酒精度、甲醇、杂油醇和总酯的含量,并研究建立该酒中多糖的含量测定方法,建立质量标准。(3)金樱子保健酒抗疲劳作用:疲劳最直接的表现就是运动耐力下降,而力竭游泳时间是反应运动耐力的重要指标。在实验中,将48只昆明小鼠,雌雄各半,随机分成4组,即空白对照组、金樱子酒高剂量组(3g/kg)、金樱子酒低剂量组(1.5g/kg)和基质对照组,分别灌胃30天后进行负重游泳实验,记录小鼠负重游泳至力竭的时间。另将48只昆明小鼠,雌雄各半,随机分成4组,即空白对照组、金樱子酒高剂量组(3g/kg)、金樱子酒低剂量组(1.5g/kg)和基质对照组,分别灌胃30天进行不负重游泳半小时后进行眼球采血,离心分离血清,测量血清尿素氮含量。(4)金樱子保健酒耐缺氧作用:常压缺氧实验:在实验中,将42只昆明小鼠(雌雄各半,留雌雄小鼠各一只不作任何处理)随机分为4个小组,即金樱子酒高剂量组(3g/kg)、金樱子酒低剂量组(1.5g/kg)、阳性对照组(西洋参口服液)和基质对照组。每组10只小鼠按标准标记法进行标识,4个小组分别灌胃高剂量药酒、低剂量药酒、西洋参口服液、15%基酒。以小鼠的体重每组给药都是10m L/Kg。在相同的实验室环境(25±1℃)进行饲养和灌胃30天,每天灌胃一次,以10m L/Kg给药量标准。各组小鼠分别给药,末次灌胃1小时后,观察观察小鼠一般行为,塞紧胶塞后开始计时,计算存活时间。急性脑缺血性缺氧实验:分组给药方法同常压缺氧实验。各组小鼠末次灌胃1小时后,将小鼠分别断头,记录小鼠断头后至张口喘气停止的时间。亚硝酸钠中毒实验:分组给药方法同常压缺氧实验。各组小鼠末次灌胃1小时后,先观察小鼠一般行为,然后将各小鼠分别进行腹腔注射5%亚硝酸钠溶液。给药后,观察、记录小鼠的呼吸、口唇、黏膜颜色、活动情况变化,逐只记录小鼠注射亚硝酸钠溶液存活的时间。(5)金樱子保健酒抗衰老作用:采用D-半乳糖建立小鼠衰老模型,观察金樱子保健酒的抗衰老作用。取小鼠40只,随机均分为空白组、模型组、金樱子酒低剂量组(430mg/kg)、金樱子酒高剂量组(860mg/kg)4组,并进行30天的适应性试验。以腹腔注射D-半乳糖造衰老模型小鼠,灌胃给予金樱子保健酒连续14天后,测定小鼠肝脏中的MDA含量,SOD活力和GSH-PX活力。结果:(1)经筛选获得金樱子保健酒的较优制备工艺,即金樱子用量为1000g,枸杞子用量为200g,糯米和米酒比例为1:6,米酒度数为35度。按该工艺制备获得的金樱子保健酒,色泽金黄透亮,口感纯正,绵柔香甜,无强烈的中药味和刺激的白酒味。(2)金樱子保健酒中酒精度、甲醇、杂油醇和总酯的含量分别为29.2%(vol)、26.4mg/L、未检出和0.27g/L,均符合国家标准,多糖含量为0.53mg/m L。(3)在金樱子保健酒抗疲劳作用试验中,负重游泳实验结果表明,金樱子保健酒高、低剂量均能提高小鼠力竭游泳时间,与空白对照组及基质对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05或0.01),可认为金樱子保健酒有抗疲劳作用。血清尿素氮测定结果发现,与空白对照组比较,金樱子保健酒高、低剂量组小鼠的血清尿素氮水平显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05或0.01),说明高、低剂量组小鼠运动后机体对血清尿素氮的产生较慢或机体对血清尿素氮的清除较快,提高了小鼠的运动适应能力,延缓了小鼠运动后疲劳的出现。(4)在金樱子保健酒耐缺氧作用试验中,常压缺氧实验阳性对照组(西洋参口服液)、金樱子酒低剂量组、金樱子酒高剂量组与基质对照组相比差异有统计学意义(P<0.05或0.01),表明阳性药物、低剂量药酒、高剂量药酒对小鼠常压缺氧均有作用;随着药酒的剂量增大,对小鼠耐缺氧作用更明显。在急性脑缺血性缺氧实验中,实验组的小鼠明显比空白组小鼠张口呼吸的时间延长,阳性对照组、金樱子酒低剂量组、金樱子酒高剂量组与基质对照组相比差异有统计学意义(P<0.05或0.01),可见金樱子保健酒能延长小鼠断头后呼吸时间,增强小鼠耐缺血耐缺氧能力。在亚硝酸钠中毒实验中,实验组与对照组对比,并没有很明显的延长小鼠的存活。阳性对照组、金樱子保健酒各剂量组与空白组相比差异没有统计学意义(P>0.05),药酒对小鼠亚硝酸钠中毒作用不明显。(5)在金樱子保健酒抗衰老作用试验中,与空白组相比,模型组的肝脏指数、脾脏指数均显著升高;金樱子保健酒高剂量组的肝脏指数显著降低(P<0.01)。与模型组相比,金樱子保健酒低、高剂量组的肝脏指数显著降低(P<0.05或0.01);但对金樱子保健酒各剂量组脾脏指数与胸腺指数均无显著影响。结果表明金樱子保健酒可降低肝脏重量和肝脏指数。SOD、MDA、GSH-Px测定结果显示,与空白组比较,模型组小鼠肝组织SOD含量显著降低,MDA含量显著升高(P<0.01或0.05),表明模型建立成功;金樱酒高、低剂量组SOD含量显著降低,而高剂量组MDA含量显著升高(P<0.01)。与模型组比较,金樱子保健酒低剂量组MDA含量显著降低,而GSH-Px酶活力显著升高,差异都具有显著性(P<0.01),但高剂量组均无显著性差异(P>0.05)。结论:(1)研究获得了金樱子保健酒的较优制备工艺,利用该工艺可制备得到色泽金黄透亮,口感纯正,绵柔香甜,无强烈的中药味和刺激的白酒味的金樱子保健酒。(2)建立了以酒精度、甲醇、杂油醇、多糖等为指标的质量控制方法,该方法可以有效控制所制备的金樱子保健酒的质量。(3)金樱子保健酒具有抗疲劳作用。(4)金樱子保健酒具有耐缺氧作用。(5)金樱子保健酒具有抗衰老作用。