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背景百草枯(paraquat)是世界范围内广泛使用的除草剂,其分子式为C12H14N2˙2Cl,纯品为白色晶体,具有极性强、易溶于水、难挥发等特点。其除草效果好,便宜易得。由于百草枯对人有很强的毒性作用,微量即可导致死亡,而且至今还没发现特效的解毒药,中毒病死率很高。研究指出,百草枯中毒的病死率与百草枯在血中的含量高度相关。目的1.建立一种快速、灵敏度高、选择性高的可有效检测血浆百草枯浓度的高效液相色谱串联质谱法(HPLC-MS/MS),对其进行系统的方法学评价,为其推广使用提供理论依据。2.应用此方法对75例百草枯中毒患者样本进行临床测定,评估其临床应用价值。方法1.通过对质谱条件,色谱条件进行优化,建立检测血浆百草枯浓度的HPLC-MS/MS法。2.对本研究建立的HPLC-MS/MS法进行系统的方法学评价。方法学评价内容包括:线性考察、定量下限、准确度和精密度、选择性和基质效应、残留以及稳定性考察。3.收集于2015年7月至2016年6月在新乡医学院第一附属医院急诊科住院的百草枯急性中毒75例患者的血浆标本。其中女性38例,年龄16-59岁;男性37例,年龄18-62岁。应用建立的HPLC-MS/MS法对标本进行百草枯浓度的检测,将患者体内血浆百草枯浓度与预后进行相关性分析。结果1.质谱条件的选择:ESI电离源,正离子模式下MRM扫描模式,CAD 12 psi,CUR 15 psi,GS1 25 psi,GS2 25 psi,IS 4500 v,TEM 500℃。百草枯选择离子对m/z为92.7>171.0,DP 50 v,EP 8 v,CE 20 v,CXP 8 v;乙基百草枯选择离子对m/z为107.0>185.1,DP 22 v,EP 7 v,CE 14 v,CXP 16 v。2.液相条件的选择:Phenomenex Kinetex 2.6μm Hilic(100×2.1 mm)色谱柱,流动相为B-乙腈和A-1%甲酸水溶液(含250 mm甲酸铵),梯度洗脱,梯度设置(0.01~0.30 min,45%~35%B;0.30~4.00 min,35%B;4.00~5.00 min,35%~45%B;5.00~6.50min,45%B),流速0.35 m L/min,进样量10μL,柱温40℃。3.方法学评价结果表明:百草枯在54.28-13190 ng/m L浓度范围内具有良好线性关系,线性方程为y=0.0001x+0.0116(R2=0.9983)。定量下限为54.28 ng/m L;定量下限浓度处批内平均准确度96.31%~120.04%,批间准确度104.43%;高、中、低浓度批内和批间的准确度值与标示值的偏差均在±15%的范围内;高、中、低及定量下限浓度处批内和批间的RSD%值均小于15%。方法的准确度高,精密度好。随机选择6份空白基质考察方法选择性和基质效应,结果表明方法选择性好、百草枯出峰位置无干扰,基质效应符合要求。稳定性考察,样品可室温放置1天稳定、2-8℃冰箱中放置1周稳定、-80℃冰箱中冻存1月稳定、样品可反复冻融处理3次。4.75例PQ中毒患者的血浆PQ浓度呈非正态分布,其中位数为2820(ng/m L);存活组(n=22)血浆PQ浓度中位数为680(ng/m L);死亡组(n=53)血浆PQ浓度中位数为6650(ng/m L);存活组与死亡组血浆PQ浓度比较,差异有统计学意义(P<0.05)。患者血浆PQ浓度预测临床结局的ROC曲线下面积为0.855。Youden指数最大时的浓度值为2431 ng/m L。结论建立的HPLC-MS/MS法测定血浆百草枯浓度准确,可靠,特异性好,样品用量少,操作简便,可应用于临床血浆中百草枯浓度常规检测。