经涎腺接种变链菌SBR和经胃灌注减毒沙门氏菌后涎腺CCL28的表达变化

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龋病是人类的常见病、多发病之一,在各种疾病的发病率中,龋病位居前列。WHO 2002~2003年度公布的最新资料显示,虽然发达国家在近30年来龋病的发病率一直处于下降趋势,但是在一些发展中国家,龋病仍呈上升趋势,龋病的防治任务是非常艰巨的,探讨与龋病病因及防治的相关问题,仍十分必要。CCL28又称MEC(mucosa associated epithelia chemokine,粘膜相关上皮趋化因子),是近年来发现的CC家族趋化因子,其受体为CCR10和CCR3。CCL28的mRNA主要分布于唾液腺、前列腺、乳腺、脾和结肠,少量分布于外周血液白细胞和其他粘膜组织。CCL28是IgA抗体分泌细胞(IgA~+ASC)有效化学引诱物,从各种粘膜淋巴器官和外分泌腺组织中,CCL28引导IgA~+ASC自血循环迁徙归巢至局部组织中。可见,CCL28在机体粘膜局部防御过程中发挥着重要作用。此外,CCL28的抗微生物活性和粘膜富集特性,与粘膜其他抗微生物因素一起产生协同效应,构成了广谱的抗微生物保护层。在前期研究中,我们已成功在JM109(DE3)中诱导表达出C端含有6个组氨酸标签的SBR融合蛋白,并纯化得到可用作防龋重组抗原疫苗的SBR融合蛋白。在本实验中,将变形链球菌SBR融合蛋白经涎腺注射和减毒沙门氏菌胃灌注对小鼠做接种免疫,采用酶联免疫吸附实验、RT-PCR方法和原位杂交技术检测颌下腺内CCL28相对表达情况,探讨防龋疫苗在涎腺局部以及远处粘膜接种后涎腺组织中CCL28的表达变化,阐明疫苗防龋的作用机制。方法:1)采用纯化的变形链球菌SBR融合蛋白作为亚单位疫苗靶向颌下腺注射免疫BALB/C小鼠,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测特异性抗体指标,同时应用RT-PCR方法和原位杂交技术检测接种后颌下腺内CCL28相对表达情况;2)采用减毒沙门氏菌经小鼠灌胃后,采用原位杂交技术检测颌下腺内CCL28相对表达情况。结果:1) ELISA结果表明:纯化的SBR融合蛋白靶向颌下腺区域免疫不仅能够显著诱导血清中特异性抗SBR-IgG抗体(P<0.05),而且还能够诱导唾液中特异性抗SBR-IgA抗体;2) RT-PCR结果表明免疫之后,小鼠颌下腺内CCL28mRNA的表达量均要比未免疫组高;3) ISH结果表明:变形链球菌SBR融合蛋白经涎腺免疫后和减毒沙门氏菌胃灌注后,小鼠颌下腺内CCL28表达量均要比未免疫组高。结论:1)本实验所表达及纯化的变形链球菌SBR亚单位疫苗经颌下腺接种途径可诱导明显的抗体应答;2)变形链球菌SBR亚单位疫苗在颌下腺作局部免疫接种,不但可诱导抗体应答,还可促进CCL28表达增高;3)减毒沙门氏菌经小鼠灌胃后,小鼠颌下腺内CCL28表达量增高。
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