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目的：通过对KKAy糖尿病小鼠进行为期8周的大黄素灌胃治疗,利用生化、RT-PCR、免疫组织化学及免疫印迹法等检验方法,探讨大黄素改善KKAy糖尿病小鼠肝脏、肌肉、脂肪组织胰岛素敏感性及降血糖的作用机制及对PI3K-AKt胰岛素信号转导通路的影响,为中药大黄素治疗糖尿病提供实验依据。材料与方法：将SPF级健康雌性KKAy小鼠32只按血糖值随机分为模型组(DM组),大黄素低治疗组(EL组),大黄素按12.5mg/kg·d灌胃,大黄素高治疗组(EH组),大黄素按50mg/kg·d灌胃,.吡格列酮治疗组(PI组),吡格列酮按1.95mg/(kg·d)剂量灌胃,并选10只C57BL/6J小鼠为正常对照组(NC组),连续灌胃给药8周。8周后测定各组小鼠空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(Fins)并计算胰岛素敏感指数(ISI)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、(?)低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),游离脂肪酸(FFA),超敏C反应蛋白(hs-CRP)及肿瘤坏死因子-a (TNF-a);应用RT-PCR法测定各组小鼠肝脏过氧化物酶体增殖物激活受体γmRNA (PPARγ mRNA)及葡萄糖转运蛋白2mRNA (GluT-2mRNA)的表达；应用免疫组织化学法测定各组小鼠肝脏过氧化物酶体增殖物激活受体Y (PPAR Y)及葡萄糖转运蛋白2(GluT-2)蛋白的表达；应用RT-PCR法测定各组小鼠骨骼肌、脂肪组织过氧化物酶体增殖物激活受体γmRNA (PPAR γ mRNA)及葡萄糖转运蛋-4mRNA (GluT-4mRNA)的表达；应用免疫组织化学法测定各组小鼠骨骼肌、脂肪组织过氧化物酶体增殖物激活受体γ (PPAR γ)及葡萄糖转运蛋-4(GluT-4)蛋白的表达；应用免疫印迹法(western-blot)测定各组小鼠肝脏、骨骼肌和脂肪组织IRS-1,PI3K, AktSer473, Fox01的蛋白表达。实验结果以均数±标准差(X±s)表示,应用SPSS11.5统计软件进行分析,组间比较用单因素方差分析(One-Way ANOVE),组间两两显著性比较采用LSD法,P<0.05为统计学具有显著性差异。结果：各组小鼠喂养8周实验结束后,禁食8小时后留取血清进行生化检验,处死各组小鼠,速取部分肝脏、股四头肌和肾周脂肪组织,置入液氮中以备RT-PCR法及western-blot法检测,另取一部分用4%的多聚甲醛固定,石蜡包埋,以备免疫组织化学检测。1.与NC组比较,DM组FBG、TG、TC、FFA、hs-CRP及TNF-α明显升高(P<0.05), ISI明显降低(P<0.05)；与DM组比较EL、EH、PI组FBG、TG、TC、FFA、hs-CRP及TNF-α明显降低(P<0.05),且成剂量依赖性,ISI明显升高(P<0.05)。2.通过对RT-PCR产物电泳结果的观察以及凝胶扫描系统进行吸光度积分分析,与NC组比较,DM组肝脏组织PPAR γ mRNA及GluT-2mRNA的表达丰度明显降低(P<0.05);肌肉、脂肪组织PPAR Y mRNA及GluT-4mRNA的丰度表达明显降低(P<0.05)；与DM组比较EL. EH、PI组肝脏组织PPAR γ mRNA及GluT-2mRNA的表达丰度明显升高(P<0.05)；骨骼肌、脂肪组织PPAR γ mRNA及GluT-4mRNA的丰度表达明显升高,(P<0.05)。免疫组化染色结果可见,与NC组比较,DM组肝脏组织PPAR γ及GluT-2的表达明显降低(P<0.05);肌肉、脂肪组织PPAR γ及GluT-4的表达明显降低(P<0.05)；与DM组比较EL、EH、PI组肝脏组织PPARγ及GluT-2的表达明显升高(P<0.05)；骨骼肌、脂肪组织PPARγ及GluT-4的表达明显升高(P<0.05)。3.通过对免疫印迹的结果进行吸光度积分分析,胰岛素刺激后,DM组与NC组比较,IRS-1、PI3K、及AktSer473蛋白磷酸化升高倍数明显降低(P<0.05), Fox01明显升高(P<0.05)；与DM组比较EL、EH组IRS-1、PI3K及胰岛素刺激后Akt Ser473蛋白磷酸化升高倍数明显升高(P<0.05), Fox01明显降低(P<0.05)。结论：1.10周龄KKAγ小鼠已经出现血糖升高,经8周高脂高热量饮食喂养后,存在典型的胰岛素抵抗,空腹血糖、血清Fins、TG、TC、FFA、hs-CRP和TNF-α明显升高,血ISI明显降低。2.大黄素能够降低KKAγ小鼠空腹血糖、血清Fins、TG、TC、FFA、hs-CRP和TNF-α,升高血ISI,减少炎症反应,高剂量大黄素干预对胰岛素敏感性及相关指标的改善作用优于低剂量组。3.模型组小鼠肝脏PPARγ和GluT-2的mRNA和蛋白表达明显下降;大黄素能够上调KKAy小鼠肝脏PPAR γ和GluT-2的mRNA和蛋白表达,改善肝脏的葡萄糖利用不足和过度释放,增强胰岛素敏感性,改善胰岛素抵抗。4.模型组小鼠骨骼肌和脂肪组织PPAR y及GluT-4的mRNA和蛋白表达明显下降；大黄素能够上调KKAy小鼠骨骼肌和脂肪组织PPAR γ及GluT-4的mRNA和蛋白表达,从而促进骨骼肌和脂肪组织对葡萄糖的摄取,从而增强胰岛素敏感性,改善胰岛素抵抗。5.胰岛素刺激后,模型组与正常对照组比较,小鼠肝脏、骨骼肌及脂肪组织中IRS-1、PI3K、AktSer473蛋白磷酸化表达明显下降,Fox01蛋白表达明显升高；大黄素可以上调KKAy小鼠肝脏、骨骼肌及脂肪组织中IRS-1、PI3K、AktSer473蛋白磷酸化表达,下调Fox01蛋白表达,从PI3K-AKt胰岛素信号传导通路改善胰岛素抵抗。