鸡IL-2基因的克隆、表达、生物学活性测定及其对鸡多联油苗免疫增强效果的研究

来源 :南京农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:gaozhanlong
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
应用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术,参照国内外巳发表文献,自行设计并合成1对引物,从ConA活化的30日龄来杭SPF鸡及崇仁绿脚麻鸡脾淋巴细胞中分别扩增出片段大小为441bp的鸡白细胞介素2 cDNA基因,将扩增片段克隆到pMD18-T载体,经酶切鉴定、PCR鉴定及DNA序列测定,表明扩增片段为鸡白细胞介素2基因。该基因与Genebank申报道的序列一致。它们编码序列与genebank中公布的鸡IL-2DNA序列仅有1-5个碱基的差异,与火鸡的同源性分别为85.9%和86.6%。而与其它哺乳动物IL-2的同源性在25.5-36.1%之间;氨基酸分析表明,他们与公布的鸡IL-2序列有1-5个氨基酸的差异,同源性在98.6%-99.3%,与火鸡的同源性分别为68.8%和69.4%。通过二级结构预测表明,他们的编码蛋白前面有22个氨基酸的信号肽序列,4个半胱氨酸形成两个二硫键,并含有4个类似于哺乳动物的α螺旋。IL-2基因进化树分析、氨基酸进化树分析及IL-2分子抗原性分析表明,鸡IL-2与哺乳动物的IL-2有着共同的渊源,从而进一步证明了IL-2具有属特异性的观点。 应用DNA重组技术,将ChIL-2基因克隆到原核表达质粒载体pBV220中,并转化大肠杆菌DH5α。通过温度诱导表达,在大肠杆菌中表达了重组鸡II-2蛋白。SDS-PAGE电泳显示,其分子量在17KD左右,42℃,4-5hr表达产物最多,约占总菌体蛋白的10%左右。超声波裂解初步分离后,表达产物主要在包涵体中,但在细胞裂解液上清中亦有相当的含量。将包含体经过初步分离纯化,复性,并且对碎菌上清,复性蛋白进行了生物学活性的检测。结果表明,重组鸡IL-2对ConA活化的鸡、鸭、鹅、鸽、鹌鹑脾淋巴细胞具有相当高的体外维持增殖作用,但对ConA活化的小鼠脾淋巴细胞的活性较低。实验证明,所获得的的重组鸡IL-2具有较高的生物学活性。为进一步动物实验提供了必要的实验依据。 本实验中使用在原核表达系统中表达的重组鸡IL-2蛋白,经过初步的分离纯化,与新城疫-禽流感-法氏囊-传染性支气管炎四联油乳剂灭活苗同时使用,肌肉注射,检测其对疫苗的免疫增强效果。实验中共分5组,每组10只鸡,以只注射新城疫-禽流感-法氏囊-传染性支气管炎四联油乳剂灭活苗组为对照组,设4个实验组,在注射疫苗的同时分别注射重组鸡IL-2蛋白0.05mg、0.10mg、0.15mg、0.20mg。实验组与对照组同时各注射新城疫等多联油苗0.5ml。采用HA、HI实验测定鸡新城疫、禽流感抗体滴度。结果表明:重组鸡IL-2对新城疫-禽流感-法氏囊-传染性支气管炎四联油乳4 摘要剂灭活苗有较强的免疫增强作用,以第3、4组的增强效果较为明显,其中对NDV和Al抗原的抗体效价,与对照组相比分别提高2.4-2.8和2.2-3.0个滴度。重组鸡1卜2在使用的过程中,没有发现具有任何毒副作用,证明是一种安全高效的免疫增强剂。
其他文献
摘要:数学语言是沟通数学教师,沟通学生和教材的媒介,是传递教学信息的重要手段,对学生产生深刻的影响,直接影响着学生对数学知识的理解和数学思维能力的形成和发展。因此,在课堂教学中,需要教师准确把握数学教学语言,使数学课堂具有较强的艺术感染力,从而推动教学质量的提高。  关键词:数学 教学 语言艺术  在数学课堂教学中,语言是教师向学生传递数学知识和信息的主要工具,语言运用得好,不仅使学生对教师的上课
摘要:影响学生学习外语的因素是多方面的,但主要一方面是学生学习外语的动机,因此,在外语教学中教师要注意运用一些方法培养和激发学生学习外语的动机。  关键词:学习动机 激发 培养  学习动机(Learning motivation)就是推动、引导和维持人们进行学习活动的一种内部力量或内部机制。学习动机一旦形成,学生就会用主动积极的学习态度去学习,对学习表现出浓厚的兴趣,上课能集中注意力去吸取知识,而
猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是一种以母猪繁殖障碍和新生仔猪呼吸道症状及高死亡率为特征的传染病。寻找安全有效的抗PRRS疫苗一直是PRRS病毒(PRRSV)研究的重点。活载体疫苗可
学位
摘要:新课标下的课程改革几年来一直是人们关注的一个热点。做为教育者要改变过去的观念,与冒俱进,才能跟上时代的步伐。在初中数学教学上要变传授知识为让学生主动学习知识,充分发挥学生主体性和教师的主导作用。  关键词:新课改 初中数学  一、重新认识,转变观念  当今世界经济是知识经济,经济发展、国力增强等不在依赖于自然资源或物资力量等物质资料,具有高度科学文化素养和人文素养的劳动者,对于21世纪人类发
在近几年的中考中,教研室的统计分析显示:审题错误或不清导致失分的情况相当严重,是学生三大重要的失分原因之一。最糟糕的情况是学生没有弄清问题就进行演算和作图。  根据在教学第一线10多年的工作,总结经验如下:  一、审题障碍的原因  1.教师的原因  我们教师对学生的审题能力造成负面影响的行为有:  (1)包办代替型。讲解例题时教师喜欢把题目读一遍,用重音体现重要的信息,或者直接说出重要的条件。  
摘要:复习是学生对学过的知识的进一步的巩固和深化,也是对学生应达到的技能技巧的全面落实和提高。在实际教学过程中,对于每一位同学来说,数学知识的内容面广、量大,知识点多,形成基本技能,提高解题技巧,并非易事,加上有些教师的复习课安排的不够合理,这样,好多学生就不爱上复习课。因此,教师必须有一套行之有效的应对策略,以缓解学生的压力,减轻学生的负担,确保在有限的时间内提高学生的数学综合素质。如何通过复习