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应用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术,参照国内外巳发表文献,自行设计并合成1对引物,从ConA活化的30日龄来杭SPF鸡及崇仁绿脚麻鸡脾淋巴细胞中分别扩增出片段大小为441bp的鸡白细胞介素2 cDNA基因,将扩增片段克隆到pMD18-T载体,经酶切鉴定、PCR鉴定及DNA序列测定,表明扩增片段为鸡白细胞介素2基因。该基因与Genebank申报道的序列一致。它们编码序列与genebank中公布的鸡IL-2DNA序列仅有1-5个碱基的差异,与火鸡的同源性分别为85.9%和86.6%。而与其它哺乳动物IL-2的同源性在25.5-36.1%之间;氨基酸分析表明,他们与公布的鸡IL-2序列有1-5个氨基酸的差异,同源性在98.6%-99.3%,与火鸡的同源性分别为68.8%和69.4%。通过二级结构预测表明,他们的编码蛋白前面有22个氨基酸的信号肽序列,4个半胱氨酸形成两个二硫键,并含有4个类似于哺乳动物的α螺旋。IL-2基因进化树分析、氨基酸进化树分析及IL-2分子抗原性分析表明,鸡IL-2与哺乳动物的IL-2有着共同的渊源,从而进一步证明了IL-2具有属特异性的观点。 应用DNA重组技术,将ChIL-2基因克隆到原核表达质粒载体pBV220中,并转化大肠杆菌DH5α。通过温度诱导表达,在大肠杆菌中表达了重组鸡II-2蛋白。SDS-PAGE电泳显示,其分子量在17KD左右,42℃,4-5hr表达产物最多,约占总菌体蛋白的10%左右。超声波裂解初步分离后,表达产物主要在包涵体中,但在细胞裂解液上清中亦有相当的含量。将包含体经过初步分离纯化,复性,并且对碎菌上清,复性蛋白进行了生物学活性的检测。结果表明,重组鸡IL-2对ConA活化的鸡、鸭、鹅、鸽、鹌鹑脾淋巴细胞具有相当高的体外维持增殖作用,但对ConA活化的小鼠脾淋巴细胞的活性较低。实验证明,所获得的的重组鸡IL-2具有较高的生物学活性。为进一步动物实验提供了必要的实验依据。 本实验中使用在原核表达系统中表达的重组鸡IL-2蛋白,经过初步的分离纯化,与新城疫-禽流感-法氏囊-传染性支气管炎四联油乳剂灭活苗同时使用,肌肉注射,检测其对疫苗的免疫增强效果。实验中共分5组,每组10只鸡,以只注射新城疫-禽流感-法氏囊-传染性支气管炎四联油乳剂灭活苗组为对照组,设4个实验组,在注射疫苗的同时分别注射重组鸡IL-2蛋白0.05mg、0.10mg、0.15mg、0.20mg。实验组与对照组同时各注射新城疫等多联油苗0.5ml。采用HA、HI实验测定鸡新城疫、禽流感抗体滴度。结果表明:重组鸡IL-2对新城疫-禽流感-法氏囊-传染性支气管炎四联油乳4 摘要剂灭活苗有较强的免疫增强作用,以第3、4组的增强效果较为明显,其中对NDV和Al抗原的抗体效价,与对照组相比分别提高2.4-2.8和2.2-3.0个滴度。重组鸡1卜2在使用的过程中,没有发现具有任何毒副作用,证明是一种安全高效的免疫增强剂。