【摘 要】
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胃蛋白酶（等电点约为1.0～2.5）是一种由胃黏膜主细胞所分泌的蛋白水解酶,在食品工业和疾病诊断领域有着广泛的应用。目前,已经报道的胃蛋白酶的检测方法有酶联免疫吸附法、色谱法和毛细管电泳法（CE）等。CE由于其具有分离效率高、分离速度快、试剂和样品消耗量少、经济等优点,在蛋白质分析领域发挥着重要作用。然而商用CE一般采用的是光程较短的紫外检测器,而且CE的样品用量少,从而导致样品在CE-UV中的检
【基金项目】
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国家自然科学基金（基金号:21674102）；
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胃蛋白酶（等电点约为1.0～2.5）是一种由胃黏膜主细胞所分泌的蛋白水解酶,在食品工业和疾病诊断领域有着广泛的应用。目前,已经报道的胃蛋白酶的检测方法有酶联免疫吸附法、色谱法和毛细管电泳法（CE）等。CE由于其具有分离效率高、分离速度快、试剂和样品消耗量少、经济等优点,在蛋白质分析领域发挥着重要作用。然而商用CE一般采用的是光程较短的紫外检测器,而且CE的样品用量少,从而导致样品在CE-UV中的检测灵敏度比较低。本论文结合聚2-甲基-2-噁唑啉（PMOXA）的抗蛋白吸附性能和聚4-乙烯基吡啶（P4VP）的pH和离子强度（ionic strength,IS）响应性,制备出对蛋白质具有可控吸附/脱附功能的PMOXA/P4VP二元聚合物混合刷涂层毛细管,将其应用于CE中,在线富集胃蛋白酶,提高胃蛋白酶的检测灵敏度。首先利用聚多巴胺（PDA）的黏附性能,将末端为氨基的PMOXA和末端为巯基的P4VP通过PDA接枝到毛细管内壁上,制备PDA/PMOXA/P4VP聚合物混合刷涂层毛细管。然后通过X射线光电子能谱（XPS）和电渗流实验对涂层进行表征。XPS结果表明,可以通过改变聚合物溶液中PMOXA与P4VP的比例调控聚合物涂 层的组成。电渗流实验的结果表明,可以通过改变背景电解质的pH和IS调节PDA/PMOXA/P4VP涂层毛细管的内表面电荷。CE在线富集胃蛋白酶的研究结果表明,当PMOXA/P4VP质量比为80/20时,灵敏度增强因子为6.3,检测限为7.5 ng/mL;此外,PDA/PMOXA/P4VP聚合物混合刷涂层具有很好的稳定性,可以连续在线富集胃蛋白酶50次。最后,将该方法成功应用于唾液基质中胃蛋白酶的在线富集,在空白唾液样品中加标1.0 mg/mL和2.0 mg/mL的胃蛋白酶,其回收率分别为99.66%和98.95%,浓度RSD值分别为8.54%和2.05%。
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