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第一部分雾化吸入母牛分枝杆菌预防小鼠支气管哮喘及其与维生素D受体关系的研究目的探讨雾化吸入母牛分枝杆菌对小鼠支气管哮喘的预防作用及其与维生素D受体的关系。方法将24只雄性Balb/c小鼠随机分为3组:正常对照组、哮喘模型组、母牛分枝杆菌雾化干预组,每组8只。哮喘组及干预组以卵清蛋白(ovalbumin,OVA)致敏制作小鼠支气管哮喘模型,对照组以PBS代替OVA造模,干预组造模前给予雾化吸入母牛分枝杆菌。每组模型制作后检测气道反应性,处死小鼠,收集肺组织和支气管肺泡灌洗液。用HE染色、AB-PAS染色观察小鼠肺部炎症。支气管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid,BALF)行炎症细胞计数,ELISA 法检测 BALF 中的 IFN-γ、IL-4、IL-13水平。实时定量PCR、免疫组化分别检测肺组织VDRmRNA及蛋白表达水平。结果与哮喘组相比,干预组小鼠气道反应性明显降低(P<O.05),与对照组比较没有明显差别(P>0.05),气道炎症病变及粘液分泌明显减轻,嗜酸性粒细胞比例明显降低(P<0.05),BALF中IL-4、IL-13降低(P<0.05),IFN-γ水平明则显升高(P<0.001),哮喘组成功制作了哮喘模型,对照组、干预组造模失败;与此同时,干预组肺组织VDR的mRNA水平,VDR蛋白水平明显降低(P<0.05)。结论VDR在哮喘小鼠中表达明显增高,提示VDR参与小鼠哮喘发病过程,可能与其在哮喘中表达增多导致Th1/Th2失衡有关;雾化吸入母牛分枝杆菌能预防哮喘小鼠模型形成,其机制可能与其降低哮喘小鼠肺VDR表达有关。第二部分雾化吸入灭活草分枝杆菌防治小鼠支气管哮喘及对CCL25, CCL20,CCR6+IL-17+γδT细胞,CCR9+γδT细胞的影响目的研究雾化吸入灭活草分枝杆菌防治小鼠支气管哮喘,及对趋化因子 CCL25,CCL20,和 CCR6+IL-17+γδT 细胞,CCR9+γδT 细胞的影响。方法将32只雄性Balb/c小鼠随机分为4组:正常对照组(A)、哮喘模型组(B)、灭活草分枝杆菌雾化吸入预防组(C)、灭活草分枝杆菌雾化治疗组(D),每组8只。B、C、D组以OVA致敏小鼠制作支气管哮喘模型,A组以PBS代替OVA,C组造模前,D组造模后给予雾化吸入灭活草分枝杆菌。各组末次雾化吸入后检测气道反应性,处死小鼠,收集肺组织和支气管肺泡灌洗液(BALF)。HE染色、AB-PAS染色观察支气管炎症和气道粘液分泌情况;BALF行炎症细胞分类计数;ELISA法检测BALF中CCL25水平;RT-PCR 检测肺组织 CCL25,CCR9,CCR6,IL-17mRNA 水平;免疫组化法检测肺CCR9,CCR6,IL-17蛋白表达水平;流式细胞术检测肺CCR9+CD3+、CCR6+CD3+、CCR9+γδTCR+、CCR6+γδTCR+淋巴细胞及IL-17+CCR6+γδTCR+淋巴细胞百分数。结果B组在12.5mg/mL及25mg/mL浓度Mch激发后sRaw明显高于A组(P<0.05) ,C组在三个浓度激发后sRaw与A组差别无统计学意义(P>0.05),且在12.5mg/mL,25mg/mL浓度激发后sRaw明显低于B组(P<0.05 ),D组25mg/mL浓度激发后sRaw明显低于B组。与A组比较,B组BALF细胞总数、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞和中性粒细胞百分数增高(P值均<0.05); C、D两组细胞总数、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞比例较B组明显降低(P值均<0.05)。B组小鼠肺CCL25, CCL20, CCR9,CCR6,IL-17 mRNA表达均明显高于A组(p值均<0.05),C组CCL25,CCL20,CCR9,CCR6,IL-17 明显低于 B 组(p<0.05),D 组 CCR9,IL-17表达低于B组(p<0.05)。ELISA检测B组BALF的CCL25浓度比A组明显升高(p<0.05),C组,D组CCL25水平均低于B组(p<0.05)。免疫组化结果:B组CCR6, CCR9, IL-17表达明显高于A组,C组(p<0.05),D组IL-17表达量低于B组(p<0.05), D组CCR9, CCR6与B组差异不具有统计学意义。B组流式细胞术结果:CCR9+CD3+、CCR6+CD3+、CCR9+yδTCR+、CCR6+γδTCR+及 CCR6+IL-17+γδTCR+淋巴细胞明显高于A组 P值均<0.05 ), C 组 CCR6+CD3+、CCR9+γδTCR+、CCR6+γδTCR+及CCR6+IL-17+γδTCR+淋巴细胞百分数低于B组(P<0.05), D组中CCR6+IL-17+yδTCR+细胞百分数低于 B 组(P<0.05)。结论 CCL25, CCL20 与 CCR6+IL-17+δ8 细胞,CCR9+y8T 细胞百分数在哮喘中明显增高,提示CCL25,CCL20可能起趋化CCR9+γδT,CCR6+IL-17+γδT细胞参与哮喘的发病。雾化吸入灭活草分枝杆菌能降低哮喘小鼠气道高反应性,减轻气道炎症,可能与下调支气管哮喘小鼠肺内CCL25,CCL20 表达,导致相应的 CCR6+IL-17+γδT 细胞,CCR9+yδT 细胞减少有关。雾化吸入灭活草分枝杆菌对小鼠哮喘的预防作用优于治疗作用。