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蛋白酶体是分布于真核细胞中的一类多亚基蛋白酶复合物，它在胞内蛋白质降解的泛素-蛋白酶体通路中起着关键性的作用。重组表达蛋白酶体的活性亚基可以用于体外筛选、寻找具有蛋白酶体抑制剂作用的化合物。本研究利用原核表达体系（pET28a(+)）构建人蛋白酶体亚基PSMB1重组体，实现了PSMB1在大肠杆菌BL21(DE3)内的可溶性表达。采用IMAC亲和层析对PSMB1重组蛋白进行纯化，纯度可达到95%以上，通过BIAcore分析，筛选出潜在的具有蛋白酶体抑制剂活性的化合物。具体研究内容和结果如下：将人源蛋白酶体亚基（PSMB1）的cDNA编码序列（全长726bp）与原核表达载体pET28a(+)连接，构建重组表达载体pET28a-PSMB1，经大肠杆菌BL21(DE3)转化后，用1mM IPTG诱导表达，温度为20℃，过夜诱导，由此表达出了相对分子量约为27KD的目的蛋白，重组蛋白根据所带的His-Tag标签采用IMAC亲和层析柱来进行纯化，得到的目的蛋白纯度超过95%。重组蛋白经过胶内酶解后进入NanoLC-MS/MS系统检测，鉴定结果表明所表达的蛋白序列与NCBI提供的蛋白序列完全一致。在体外BIAcore实验分析中，重组PSMB1蛋白对不同的化合物有着不同的结合能力，其中与雷公藤红素的结合能力较强，当雷公藤红素的浓度为10μM时，其与重组蛋白的结合力响应值达27RU，并且具有良好的浓度依赖型。这一部分内容为后续研究建立了一种表达、纯化人源蛋白酶体亚基PSMB1的方法，并且可以应用于体外筛选潜在的蛋白酶体抑制剂。表皮生长因子受体（EGFR）是一种广泛分布于人体各组织细胞膜上的多功能糖蛋白，在抗肿瘤的分子靶向治疗方面有着重要作用。重组表达EGFR，可以用于体外筛选潜在的与EGFR有结合能力的活性化合物。本研究中我们采用三种表达系统（原核、哺乳动物细胞及昆虫细胞）对EGFR胞外域进行了重组表达，以期获得具有生物活性的重组蛋白。具体研究内容及结果如下：1.人表皮生长因子受体EGFR在原核（E. coli）表达系统中的表达将EGFR cDNA的编码序列（1857bp）与原核表达载体pET28a(+)连接，构建重组表达载体pET28a-EGFR，经大肠杆菌BL21(DE3)转化后，采用不同温度以及IPTG浓度来进行诱导，均未发现有明显蛋白条带。2. EGFR在哺乳动物细胞（CHO）表达系统中的表达将EGFR cDNA的编码序列（1857bp）与哺乳动物细胞表达载体pcDNA3.1/myc-His(-)A连接，构建重组表达载体pcDNA3.1/myc-His(-)A-EGFR，转染CHO细胞，对照和转染组也未见有明显区别。3. EGFR在昆虫细胞（sf9）表达系统中的表达将EGFR cDNA的编码序列（1857bp）与昆虫细胞供体载体pFastBacHTb连接，构建重组供体表达载体pFastBacHTb-EGFR，供体质粒与病毒基因组同源重组后转染sf9细胞，收集第三代病毒进行蛋白表达。Western Blot验证有两条蛋白条带。一条在130KD，一条在17KD左右。进一步的大批量表达此蛋白以及重组蛋白的纯化和鉴定工作还在进行中。