p53 上调凋亡调控因子(p53 upregulated modulator of apoptosis,PUMA)是具有强大促凋亡作用的BCL-2家族BH3-only亚家族成员。它可以通过P53依赖途径及非依赖途径激活Bax/Bak寡聚化,使线粒体外膜通透性增加,从而导致细胞色素c释放促使细胞凋亡。PUMA是p53促凋亡途径的必须因子,在肿瘤的发生过程及治疗中发挥着重要作用,而且PUMA的作用与p53状态无关,相比p53能够更直接的促凋亡,是癌症治疗中一个很有希望的作用靶点。从2001年发现PUMA以来,PUMA的研究取得重大进展,但是PUMA介导细胞凋亡的确切机制还存在巨大争议。因此解析PUMA或PUMA与抗凋亡BCL-2家族蛋白复合物结构,能够有助于了解PUMA促凋亡的详细机制,对细胞凋亡机制理论研究和癌症治疗都有重要意义。本课题采用原核大肠杆菌系统表达目的蛋白,首先通过优化表达菌株、诱导剂浓度和诱导温度对表达条件进行摸索,然后尝试进行定点突变模拟磷酸化,最终通过在C端与N端构建不同长度的截取得到了稳定可溶目的蛋白。然后用亲和层析和凝胶过滤层析方式纯化目的蛋白,采用气相扩散法对目的蛋白进行结晶条件的初筛,未能得到晶体。但是我们发现PUMA第150-163位氨基酸的缺失会使PUMA由多聚状态变成单体,PUMA134-165位氨基酸可能形成使蛋白多聚化的coiled coil结构。我们还纯化到高纯度的PUMA与BCL-xL复合物,目前正在对复合物蛋白进行晶体条件初筛的实验,为后续的晶体生长优化奠定基础。