【摘 要】
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获得性免疫系统和先天性免疫系统是人体的免疫系统的两大分支。先天免疫系统是非特异性的、快速的防御机制,而获得性免疫系统能给人体带来针对抗原特异性的,长久的保护机制。获得性免疫系统又分为体液免疫和细胞免疫,在体液免疫发挥功能时,滤泡辅助性T细胞（Follicular helper T cell,TFH）起到关键性作用。但是目前对于滤泡辅助T细胞的研究还不够详尽,因此尽量全面的找出对滤泡辅助性T细胞起到
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获得性免疫系统和先天性免疫系统是人体的免疫系统的两大分支。先天免疫系统是非特异性的、快速的防御机制,而获得性免疫系统能给人体带来针对抗原特异性的,长久的保护机制。获得性免疫系统又分为体液免疫和细胞免疫,在体液免疫发挥功能时,滤泡辅助性T细胞（Follicular helper T cell,TFH）起到关键性作用。但是目前对于滤泡辅助T细胞的研究还不够详尽,因此尽量全面的找出对滤泡辅助性T细胞起到重要作用的影响因子,对后续相关疾病的研究,疫苗的开发有重要的意义。早期的基因筛选技术多是依赖于利用shRNA进行RNA水平的基因干扰,RNA水平的基因干扰有着效率较低,易脱靶转录水平补偿等问题。因此,我们构建了小型sgRNA文库感染Cas9-SM-EIIA小鼠的CD4+T细胞,随后感染过的T细胞过继回输到受体小鼠在感染LCMV后进行体内分化,之后通过流式技术和二代测序分析供体细胞。高通量测序结果中,与其他基因的sgRNA相比,有两个候选基因的sgRNA的在TFH细胞中显著富集,暗示这俩候选基因可能在TFH细胞分化中起着负调控作用。随后我们在Cas9-SM-EIIA CD4+T细胞单独转染候选基因sgRNA,再过继回输到受体小鼠,感染LCMV后转染sgRNA的供体细胞分化成TFH细胞的比例显著大于未感染候选基因sgRNA的TFH细胞,这些结果表明这俩候选基因在TFH细胞分化中可能起着负调控作用。该CRISPR-Cas9筛选系统为后续深入开展TFH研究提供了强有力的技术支持。
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