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136kD的溶菌酶释放蛋白（muraminidase-releasedprotein，MRP）和110kD的胞外蛋白因子（extracellular proteinfactor，EF）是猪链球菌2型（Streptococcus suis type 2）的毒力相关蛋白。提取猪链球菌2型江苏分离株HA9801的胞壁蛋白和胞外蛋白，分别进行SDS-PAGE，切割相对分子量为136kD的MRP和110kD的EF，按常规方法制备其抗体。用此抗体分别以免疫转印和ELISA法检测猪源链球菌18株国内分离株、1株德国分离株及1株猪链球菌2型人分离株的毒力相关蛋白。 提取20株待检菌株的胞壁和胞外蛋白，经测SDS-PAGE，与HA9801株的MRP和EF的抗体作免疫转印。结果显示，11株MRP阳性，10株EF及EF~*阳性，MRP及EF的分布存在4种表型：MRP~+EF~+（8/20），MRP~+EF~*（1/20），MRP~+EF~-（1/20），MRP~-EF~-（10/20）。 以培养上清作抗原，分别以马链球菌兽疫亚种参考株ATCC35246和江苏分离株HA9801为阴性与阳性对照，建立了Dot-ELISA和间接ELISA检测法。结果显示，两种ELISA的检测结果一致，MRP和EF的阳性率均为61％（11/18）。和Dot-ELISA相比，间接ELISA包被抗原的时间较长，背景也较深，但血清用量少。和免疫转印相比，ELISA只需用细菌培养上清作抗原进行检测，不需进一步处理，而且灵敏度很高，可用于大规模流行病学调查。 根据猪链球菌2型MRP和EF的基因序列，用DNAstar软件预测了抗原决定簇。根据预测结果，选定相应基因片段在大肠杆菌中克隆和表达。用BLAST软件将MRP和EF的氨基酸序列分别与Genebank中的蛋白质序列数据库进行同源性比较，结果表明，MRP与10种蛋白有27～33％的同源性，但与A群链球菌的M蛋白无同源性。根据已有信息绘制了MRP结构模式图。EF与肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae）的IgAl蛋白酶有48％的同源性。 以HA9801的基因组DNA为模板，通过PCR技术，分别扩增mrp基因304～1168bp序列和epf基因1207～1675bp序列，并按正 肉京农业大学博士学位沦文确的阅读框架分别定向克隆到表达羹体pQEXJp！中谷恍甘肽转移酶（GST）基因的下游；将重组质粒转化人大肠杆菌 BL21株，经 IPTO诱导，可分别表达分子量约为57kD（含MRP片段）和41kD（含EF片段）的融合蛋白。用MRP抗血清进行的免疫转印分析表明，57kD的融合蛋白可被MRP抗血清识别，显示该融合蛋自具有MRP的抗原表位；用 EF抗血清进行的免疫印迹分析表明，4比D的融合蛋白不能被EF抗血清识别，说明BF的抗原决定碟不存在于epf基因。1207～1675hp序列编码的肽链中。以上结果为进一步研究MRP和EF的结构和功能提供了方便。