RhoA/ROCK1信号通路在BMSCs肝向分化过程中的变化特征

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目的:探讨RhoA/ROCK1信号通路在骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)向肝细胞分化过程中的变化特征,明确BMSCs肝向分化过程中存在的新干预靶点,以期为临床BMSCs移植治疗肝硬化提供更好的理论依据。  方法:体外培养BMSCs,应用不同浓度的肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)(0ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、30ng/ml)诱导BMSCs分化,分别于3d、1w、2w、3w应用MTT检测细胞增殖情况,生化试剂盒检测甲胎蛋白(alpha fetal protein,AFP)、白蛋白(Albumin,ALB)的含量,Western blot检测RhoA、ROCK1、p-MLC蛋白的表达。  结果:1、细胞增值率变化显示:不同浓度的HGF(0ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、30ng/ml)诱导BMSCs肝向分化,细胞增值率以HGF浓度为20ng/ml时最佳(P<0.05),且随着时间的延长细胞增值率呈升高趋势,3w时细胞增值率最高(P<0.05)。  2、AFP、ALB浓度变化情况显示:20ng/ml组、30ng/ml组诱导BMSCs分化的第3d无AFP的表达,诱导分化1w时开始出现AFP的表达,2w时表达增强,3w时表达减弱,20ng/ml组、30ng/ml组诱导BMSCs分化2w时开始出现ALB的表达,3w时表达增高。10ng/ml组诱导BMSCs分化3w时AFP稍有表达,未见ALB的表达,0ng/ml组在诱导BMSCs分化过程中未见AFP和ALB的表达。  3、RhoA、ROCK1、p-MLC蛋白变化显示:随着HGF浓度的增加,RhoA、ROCK1、p-MLC蛋白呈下降趋势(P<0.05),具有浓度依赖性。并随着孵育时间的延长,RhoA、ROCK1、p-MLC蛋白呈下降趋势(P<0.05),呈现时间依赖性。  结论:HGF诱导BMSCs肝向分化过程中RhoA/ROCK1信号通路受抑,并具有一定的时间及浓度依赖性。
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