重组溶瘤腺病毒RCAdC68.pⅨ-EGFP的构建及其对结肠癌细胞增殖的影响

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目的本实验通过等温组装法构建重组溶瘤腺病毒RCAd C68.p IX-EGFP,并通过比较RCAd C68.p IX-EGFP与复制缺陷型重组腺病毒Ad C68-ΔE1-EGFP对结肠癌细胞的杀伤作用,初步观察RCAd C68.p IX-EGFP对结肠癌细胞增殖的影响。方法以黑猩猩型腺病毒Ad C68为模板,利用等温组装法构建腺病毒衣壳蛋白p IX展示EGFP的重组溶瘤腺病毒质粒,HEK293细胞中包装成完整病毒并扩增、纯化,获得具有溶瘤效应可表达EGFP的重组溶瘤腺病毒载体,命名为RCAd C68.p IX-EGFP。以不同的病毒剂量(100、500、2500、12500vp/cell)感染结肠癌细胞HCT 116、NCI-H508、HT-29及人胚肾细胞HEK-293,分别于感染后第3、5、7天用MTT法检测RCAd C68.p IX-EGFP对不同细胞的抑制率,结晶紫染色实验检测RCAd C68.p IX-EGFP对不同细胞的杀伤作用,荧光显微镜与相差显微镜观察细胞形态学变化和病变情况。结果重组溶瘤腺病毒载体RCAd C68.p IX-EGFP构建成功。RCAd C68.p IX-EGFP对结肠癌细胞HCT116、NCI-H508、HT-29的增殖抑制作用与病毒感染剂量及感染时间成正比,以500vp/cell病毒感染剂量感染细胞7天后,RCAd C68.p IX-EGFP对HCT 116、NCI-H508、HT-29、HEK293细胞的抑制率分别为86.70%、96.85%、99.70%、99.99%,Ad C68-ΔE1-EGFP的细胞抑制率分别为6.57%、11.46%、9.11%、99.99%,RCAd C68.p IX-EGFP与Ad C68-ΔE1-EGFP对结肠细胞增殖抑制作用的差异有统计学意义(P<0.05),而对HEK-293细胞增殖抑制作用的差异无统计学意义(P>0.05)。结论本研究成功构建重组溶瘤腺病毒载体RCAd C68.p IX-EGFP,RCAd C68.p IX-EGFP能显著抑制结肠癌细胞HCT 116、NCI-H508、HT-29的增殖,初步显示出RCAd C68.p IX-EGFP作为溶瘤病毒载体治疗肿瘤的潜能。
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