L型变异对结核分枝杆菌耐药性的影响及茜草素抗菌作用的研究

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目的建立结核分枝杆菌L型的诱导模型,观察L型变异对结核分枝杆菌耐药性的影响。综合评估中药茜草素对结核分枝杆菌L型的作用,为开发新型抗结核中药提供实验基础。方法①通过3种不同浓度的药物与3种结核分枝杆菌L型培养基进行组合,将结核分枝杆菌细菌型诱导为L型菌株;②分离临床标本中的结核分枝杆菌L型菌株;③通过抗酸染色、荧光染色、电镜检查、结核抗原检测及基因检测方法鉴别诱导和临床分离的结核分枝杆菌L型菌株;④配制含一线抗结核药物的药敏培养基和茜草素药敏培养基;⑤将结核分枝杆菌L型接种于含一线抗结核药物培养基及培养;⑥对诱导和临床分离的结核分枝杆菌L型菌株进行DNA提取及相关耐药基因测序,并分析其与结核分枝杆菌L型表型变异的联系;⑦将结核分枝杆菌L型接种于茜草素药敏培养基及培养,观察中药茜草素对结核分枝杆菌L型的作用。结果①成功建立结核分枝杆菌L型的诱导模型,以含2.5μg/ml的异烟肼在92-3TB-L液体培养基中诱导结核分枝杆菌L型的效果最佳;②结核分枝杆菌L型的表型变异可以造成结核分枝杆菌的耐药性,诱导的结核分枝杆菌L型在基因序列未改变的情况下对异烟肼、利福平、乙胺丁醇和链霉素耐药;③茜草素在药物浓度为640μg/ml,对结核分枝杆菌L型有明显的抑菌作用。结论结核分枝杆菌L型的表型变异与其耐药性有一定的联系,中药茜草素在体外对结核分枝杆菌有明显的抑菌作用。
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