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目的:
骨髓间充质干细胞移植,是临床治疗中枢神经损伤性疾病的极具前景的方法之一。由于MSCs源性神经细胞易于凋亡,因而如何抑制其凋亡的发生,延长被移植细胞的存活时间是目前急待解决的关键问题。因此,阐明MSCs源性神经细胞的凋亡规律,探讨应用相关细胞凋亡抑制剂延长其存活时间等也是骨髓间充质干细胞移植研究领域中,急需解决的问题。在脑缺血疾病和神经退行性疾病中,神经细胞凋亡是十分重要的发病机制。在这些情况下,神经细胞凋亡增强的机制与p75NTR的高表达密切相关[1-5]。
针对这些关键性问题,本研究拟从大鼠骨髓中提取间充质干细胞,并诱导、分化为神经细胞。在此基础上,观察MSCs源性神经细胞的凋亡情况。并同时观察p75NTR在凋亡中的作用,为今后抑制MSCs源性神经细胞的凋亡,延长其存活时间寻找新的靶点。
方法:
从大鼠骨髓中分离骨髓间充质干细胞,体外传代培养后,诱导其向神经细胞分化。应用免疫荧光印迹的方法检测诱导后神经细胞表面的标记物nestin、NF-200及GFAP。应用流式细胞术检测诱导后神经细胞的凋亡。应用RT-PCR及westernblot观察骨髓间充质干细胞来源神经细胞凋亡与p75NTR的关系,进一步应用p75NTR抑制剂,研究其对诱导的神经样细胞凋亡的影响。
结果:
体外诱导后,骨髓间充质干细胞90%以上向神经细胞转化,同时表面标记物nestin在0h、6h、12h、和24 h表达分别为53.1±5.3、92.6±1.4、78.6±4.2和30.5±3.4;NF-200在6h、12h、和24 h表达分别为89.3±3.9、92.6±2.2and96.8±1.9; GFAP表达为阴性。诱导后0h、6h、12 h和24 h神经细胞凋亡检测结果分别为2.84±0.32、2.22±0.43、8.77±0.86和13.85±1.68。RT-PCR结果为6h、12h、24h可检测到p75NTR表达。Western blot结果为6h、12h、24h可检测到p75NTR表达。应用p75NTR抑制剂后,TUNEL法检测可见到应用抑制剂的神经样细胞凋亡显著减少。
结论:
骨髓间充质干细胞可体外诱导分化为神经样细胞。p75NTR与MSCs来源神经细胞的凋亡有相关性。